【求助】ECL发光法背景高怎么办?...

【求助】ECL发光法背景高怎么办?

可以考虑封闭是不是不好；是不是有加一抗、二抗时气泡多？可以试着降低二抗浓度；发光液加的太多，不知你用的那种发光剂，有可能不佳敏感；曝光时可以从30s开始，摸摸条件。

谢谢，我一直怀疑封闭的问题，主要是实验室同学亦是如此封闭，让我很是郁闷，我再试试加长封闭时间，加抗体有没有气泡太多，我没有注意，下次一定注意，谢谢提醒；发光液我用的是碧云天的，混合后1ml，滴加浸润2min，暗室中观察整张膜都有荧光，感觉就不对了，曝光时间我再摸摸条件，很感谢！

背景过高，一般考虑封闭和一抗二抗问题。封闭可以考虑换用5%BSA，延长封闭时间。一抗可以试一下1：4000，1：5000，可以试一下。二抗再稀释一下，楼主可以多试几次。我们实验室也遇到过这种情况，他们就是稀释一抗和二抗。还有一种情况就是一抗特异性不好，这个是一抗原因，解决办法就是换掉一抗，用其它公司的试试。祝好运！

另外，你半干转的条件是什么啊？说一下，也许大家可以更还解决你实验中的问题？

1. 适当减少减少上样量
2. 5％脱脂奶粉，4度过夜封闭
3. 二抗用1：5000，适当缩短二抗孵育时间，可以室温一个小时
4. ECL工作液加上后，只要目的条带出来了，就不用继续浸润了
5. 缩短曝片时间
有些多抗不太好做，需要反复摸索。

我告诉你……你多花一点钱，买PIERCE的……保证不会了

谢谢各位的指导，明天试一试，看看情况

我用的MILLPORE的发光液，现在搞活动，三百多块钱。敏感度挺高，用时可节省，少用。还是比较划算的！二抗稀释度很大，要摸条件。楼上几位说的都很有道理，试试吧。祝好运！

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