发光剂常用的标记方法不包括 A碳二亚胺缩合法 B过碘酸钠氧化..._发光剂_其他_生化试剂_知道

血糖与尿糖的测定方法（一）血糖测定血糖是动物实验中最常用的测定指标之一。血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法，是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同ATP反应，产生葡萄糖－6－磷酸及ADP，葡萄糖－6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸脱氧酶存在时，同NADP＋作用．产生NADPH及6—磷酸葡萄糖酸内酯，NADPH在340nm有吸收峰。葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化β葡萄糖产生葡萄糖酸内酯和H202的反应而建立。血糖的酶法测定是利用酶的特异性催化而建立起来的，具有高度的特异性，同时，可以避免使用化学方法中的一些有害试剂等。操作过程简便，便于自动化检测。（二）尿糖测定1．定性检测常用的方法有铜还原法和葡萄糖氧化酶试纸法。前者用斑氏试剂，是一种在碱性溶液中含有铜离子、柠檬酸钠的复合剂。原理是试剂与尿液共沸时，葡萄糖或其他还原性物质能使Cu2＋还原成为亚铜离子(Cu＋)，形成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化亚铜。后者是将葡萄糖氧化酶试剂吸附于滤纸上制成试纸与标准色板比较，即可得出结果。2．定量检测尿液葡萄糖的定量检测可采用血液葡萄糖测定的方法，以邻甲苯胺法最为方便、实用。3．糖类鉴定在正常或某种疾病状态时，尿液中除葡萄糖外，尚可能出现其他糖类，如乳糖、果糖、戊糖等。斑氏试剂不能鉴定属何种糖类。此外，还受到其他还原性物质的干扰。葡萄糖氧化酶试纸法可将葡萄糖与其他还原性糖类相区别，因为半乳糖、戊糖和其他还原性糖与氧化酶试纸不发生反应。为了试验尿液中是否含有这些糖类，可以利用特殊的显色试剂或层析手段加以分离和鉴定。如果糖可利用Scliwanoff反应鉴定，其原理为果糖与溶于硫酸内的间苯二酚溶液加热后显红色沉淀反压。其他糖类不产生显色反应。戊糖可利用Bial试验检测，其原理是戊糖与盐酸共热时，生成糖醛，后者与5—甲基间苯二酚反应形成绿色化合物。若溶液变成绿色，表示有戊糖存在。（三）糖化血红蛋白测定糖化血红蛋白（GHb）测定有许多方法，如离子交换层析法、高效液相层析法、亲和层析法、比色法、放射免疫分析法、电泳法和等电聚焦法等。大多数方法测定结果为总糖化血红蛋白(HbA1)。目前常用的为亲和层析和控制温度的离子交换层析微柱法。微柱法是将标本加在Bio-Rex70阳离子交换树脂柱上，该树脂带有负电荷，与带正电荷的血红蛋白有亲和力。在适当的离子强度和pH的缓冲液中，GHb所带正电荷较HbA少，故与树脂的结合力相对低，容易被洗脱。用分光光度计在410nm分别测定各血红蛋白组分，从而求出GHb占Hb的百分比。