异硫氰酸荧光素为什么可以发出荧光...

异硫氰酸荧光素为什么可以发出荧光

用来做荧光染料免疫荧光法 免疫荧光法的基本原理是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体.常用的荧光素有①异硫氰酸荧光素（fluorecein isothiocyante,FITC）,为黄色、橙黄色或褐黄色结晶粉末,有两种异构体,易溶于水和酒精等溶剂.分子量为389,最大吸收光谱为490～495,最大发射光谱为520～530urn,呈现明亮的黄绿色荧光,是最常用的标记抗体的荧光素.②四甲基异氰酸罗达明（tetrametrylrhodarnine isothiocyante,TRITC）是一种紫红色粉末,较稳定,是罗达明（rhodamine）的衍生物.最大吸收光谱550urn,最大发射光谱620urn呈橙红色荧光,与FITC发射的黄绿色荧光对比鲜明,常用于双标记染色. 按照抗原抗体反应的结合步聚,免疫荧光法可分为以下三种. 1．直接法 用荧光素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以检查出相应的抗原成分. 2．间接法 先用特异性抗体与相应的抗原结合,洗去未结合的抗体,再用荧光素标记的抗特异性抗体（间接荧光抗体）与特异性抗体相结合,形成抗原一特异性抗体一间接荧光抗体的复合物.在此复合物上带有比直接法更多的荧光抗体,所以,此法较直接法灵敏. 3．补体法 用特异性的抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与之相结合,就形成了抗原一抗体一补体一抗补体荧光抗体的复合物.荧光显微镜下所见到的发出荧光的部分即是抗原所在的部位.补体法具有敏感性强的优势,同时适用于各种不同种属来源的特异性抗体的标记显示,在各种不同种属动物抗体的检测上为最常用的技术方法