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2007-11-12 09:05
呵呵，楼主是这方面的专家，转载相关资料，供大家交流
为产生有效的抗体，第一步是设计好的抗原，此抗原可以来源于整个蛋白质的一部分：一个或几抗原决定簇区域的序列。 （1） 什么是抗原决定簇？ 蛋白质表面部分可以使免疫系统产生抗体的区域叫抗原决定簇。一般抗原决定簇是由6－12 氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列（蛋白质一级结构） 组成或由不连续的蛋白质三维结构组成。 （2） 选择抗原决定簇 为选择好的抗原决定簇，应符合以下三点： 1．亲水性：大部分抗原决定簇是亲水性的； 2．处于结构表面：大部分抗体只与蛋白质表面部分结合； 3．有弹性：许多已知的抗原决定簇是在自由活动区域。所以一般来说蛋白质的N 端及C 端是很好的抗原决定簇区域。 （3） 抗原性与免疫原性 单独的抗原决定簇是不能产生免疫反应，它只有抗原性但没有免疫原性，为使它能具有免疫原性，它必须偶联在载体蛋白上。 （4） 抗原决定簇的预测 对每个氨基酸的表面可接触性(Surface Accessibility)、亲水性(Hydrophilicity)和弹性(flexibility)进行计算可以大体推算出抗原决定簇区域，抗原决定簇区域应综合以上三个特点。目前市面上有几个专业测定软件满足需要：如MacVestor , Protean , GCG 等。 （5） 设计合成多肽 一旦抗原序列决定后，接下来就是设计所需合成的多肽了，设计时除了注意其序列外，同时应考虑一些产生免疫机制问题，如： 1．载体蛋白的接入位置； 2．如果其序列是位于蛋白C 端的，此多肽C 端一定是自由的羧基团，而N 端被掩盖。同时如果载体蛋白是通过半胱氨酸偶联，此半胱氨酸应处于N 端位置，使C 端完全暴露给免疫系统。 3．相反，如果其序列是位于蛋白质N 端，此多肽C 端应掩盖，暴露出N端，而载体蛋白应在C 端。 （6） T 细胞抗原决定簇 不是所有多肽序列是用来直接产生抗体的，特别是一些序列短、并通过多抗原肽系统获得的免疫原性的肽。而这些是通过T 辅助细胞抗原决定簇来产生免疫。一个T 辅助细胞抗原决定簇多肽序列可以增强B 细胞产生抗体能力，但是又是由其遗传背景所决定的，设计此类多肽必须知道其抗原决定簇和被免疫动物的遗传背景。 |
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2007-11-03 23:45
合成的人工抗原免疫原性受到多种因素的影响，设计时需要考虑主要因素包括载体蛋白的性质、半抗原的分子空间结构、间隔臂的长度和分子结合比。
常用的载体蛋白有牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）、钥孔血蓝蛋白（KLH）、人血清白蛋白（HSA）、兔血清白蛋白（RSA）及人工合成的多聚赖氨酸（PLL）等，较多选用BSA作载体蛋白，原因是BSA理化性质稳定，不易变性，价廉易得，分子内含自由氨基多，在较大pH值范围和不同离子强度下均能保持较大的溶解度，更有利于偶联反应的进行。 Thomas报道，人工抗原的免疫原性与半抗原分子空间结构的复杂程度呈正相关，含有芳香结构的半抗原偶联成功率为33%，不含芳香结构的半抗原偶联成功率仅有9%. Sionf等认为，一定长度的间隔臂的介入，有助于半抗原结构的暴露，有利于特异性抗体的产生，间隔臂过长可形成新的抗原表位，易被细胞识别而产生“桥抗体”，间隔臂过短则载体蛋白的空间位阻将影响细胞对半抗原的识别，不产生特异性抗体，最好的间隔臂是3～6个直链碳，长度以5～8Å为宜，以－N＝N－作间隔臂，长度适宜，既可产生特异性抗体，又避免了桥抗体的出现。 关于半抗原与载体蛋白的最佳分子结合比目前尚未形成定论，Eilange]提出最佳分子结合比为5～25∶1，Schneider等提出以10～20∶1为好，吴松如等认为以3～45∶1为好。 个人认为，不同半抗原其分子构象、电子分布、结构复杂性、基团极性、亲水性或疏水性等性质不同，最佳分子结合比也不尽相同。不同的结合比的合成抗原，可以通过调节不同的免疫剂量得到较佳的免疫效果。 |
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2007-11-02 10:37
呵呵，楼主是这方面的专家，转载相关资料，供大家交流
为产生有效的抗体，第一步是设计好的抗原，此抗原可以来源于整个蛋白质的一部分：一个或几抗原决定簇区域的序列。 （1） 什么是抗原决定簇？ 蛋白质表面部分可以使免疫系统产生抗体的区域叫抗原决定簇。一般抗原决定簇是由6－12 氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列（蛋白质一级结构） 组成或由不连续的蛋白质三维结构组成。 （2） 选择抗原决定簇 为选择好的抗原决定簇，应符合以下三点： 1．亲水性：大部分抗原决定簇是亲水性的； 2．处于结构表面：大部分抗体只与蛋白质表面部分结合； 3．有弹性：许多已知的抗原决定簇是在自由活动区域。所以一般来说蛋白质的N 端及C 端是很好的抗原决定簇区域。 （3） 抗原性与免疫原性 单独的抗原决定簇是不能产生免疫反应，它只有抗原性但没有免疫原性，为使它能具有免疫原性，它必须偶联在载体蛋白上。 （4） 抗原决定簇的预测 对每个氨基酸的表面可接触性(Surface Accessibility)、亲水性(Hydrophilicity)和弹性(flexibility)进行计算可以大体推算出抗原决定簇区域，抗原决定簇区域应综合以上三个特点。目前市面上有几个专业测定软件满足需要：如MacVestor , Protean , GCG 等。 （5） 设计合成多肽 一旦抗原序列决定后，接下来就是设计所需合成的多肽了，设计时除了注意其序列外，同时应考虑一些产生免疫机制问题，如： 1．载体蛋白的接入位置； 2．如果其序列是位于蛋白C 端的，此多肽C 端一定是自由的羧基团，而N 端被掩盖。同时如果载体蛋白是通过半胱氨酸偶联，此半胱氨酸应处于N 端位置，使C 端完全暴露给免疫系统。 3．相反，如果其序列是位于蛋白质N 端，此多肽C 端应掩盖，暴露出N端，而载体蛋白应在C 端。 （6） T 细胞抗原决定簇 不是所有多肽序列是用来直接产生抗体的，特别是一些序列短、并通过多抗原肽系统获得的免疫原性的肽。而这些是通过T 辅助细胞抗原决定簇来产生免疫。一个T 辅助细胞抗原决定簇多肽序列可以增强B 细胞产生抗体能力，但是又是由其遗传背景所决定的，设计此类多肽必须知道其抗原决定簇和被免疫动物的遗传背景。 |
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2007-11-06 13:50
合成的人工抗原免疫原性受到多种因素的影响，设计时需要考虑主要因素包括载体蛋白的性质、半抗原的分子空间结构、间隔臂的长度和分子结合比。
常用的载体蛋白有牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）、钥孔血蓝蛋白（KLH）、人血清白蛋白（HSA）、兔血清白蛋白（RSA）及人工合成的多聚赖氨酸（PLL）等，较多选用BSA作载体蛋白，原因是BSA理化性质稳定，不易变性，价廉易得，分子内含自由氨基多，在较大pH值范围和不同离子强度下均能保持较大的溶解度，更有利于偶联反应的进行。 Thomas报道，人工抗原的免疫原性与半抗原分子空间结构的复杂程度呈正相关，含有芳香结构的半抗原偶联成功率为33%，不含芳香结构的半抗原偶联成功率仅有9%. Sionf等认为，一定长度的间隔臂的介入，有助于半抗原结构的暴露，有利于特异性抗体的产生，间隔臂过长可形成新的抗原表位，易被细胞识别而产生“桥抗体”，间隔臂过短则载体蛋白的空间位阻将影响细胞对半抗原的识别，不产生特异性抗体，最好的间隔臂是3～6个直链碳，长度以5～8Å为宜，以－N＝N－作间隔臂，长度适宜，既可产生特异性抗体，又避免了桥抗体的出现。 关于半抗原与载体蛋白的最佳分子结合比目前尚未形成定论，Eilange]提出最佳分子结合比为5～25∶1，Schneider等提出以10～20∶1为好，吴松如等认为以3～45∶1为好。 个人认为，不同半抗原其分子构象、电子分布、结构复杂性、基团极性、亲水性或疏水性等性质不同，最佳分子结合比也不尽相同。不同的结合比的合成抗原，可以通过调节不同的免疫剂量得到较佳的免疫效果。 |
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2007-11-08 10:02
象棋筛子 是的 ，其实 现在有很多小分子药物，特别是结构简单、 分子量小的， 在合成完全抗原时采用衍生化法，就是将药物改造，引入新的基团，例如引入苯环 ， 从而有利于将抗原决定簇暴露出来。 象棋筛子 wrote: ...... 同意筛子大哥的观点！ :-D(y) |
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2007-11-08 18:54
支持一下，贡献《蛋白质连接技术》Word和PDF版各一本，但是文件比较大，2M多，不好上传，大家有需要可以联系我。
《蛋白质连接技术》已上传至免疫版网盘，请点击下载。 |
已解决
