【分享】单克隆抗体药物的质量检测[精华]...

【分享】单克隆抗体药物的质量检测[精华]

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horizon801
这一点，不敢苟同，想与版主交流下。
这里面涉及到一个critical quality attributes的概念。多数抗体药物是九十年代末上市的，究竟哪些质控点影响临床疗效，哪些会造成免疫反应。在业内并没有公论。FDA只说，就事论事，CASE by case.
我们看下国内药典几个抗体品种的质量标准。里面没有上文提到了电荷变异研究。但是追踪文献，这恰是业内最近关注的一个点。还有CE，毛细管电泳应用于蛋白检测，已经是大势所趋。
我曾经发帖子求FDA的任一上市抗体质量标准，或者是最新药典关于抗体药物的通则，并没有得到。
如何在USP上查找抗体药物相关质量标准 - 蚂蚁淘论坛如果版主或大家有这方面的经验，请指正。

......

我还是认为，对于一个深入研究生物制药的人而言，这不是什么问题。这是一个基本问题。
因为我研究生物制药很少，也就根据自己看法，大概说一说。
如下指南和指导原则，如果大部分看了，应该对建立抗体类药物的思路，较清晰了。
1-cde《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则2003》
2-EP7《monoclonal antibody for human use》
3-ICH Q6B《测试方法和接受标准：生物技术和生物药品》
4-FDA《Assay Development for Immunogenicity Testing of Therapeutic Proteins》
5-FDA《Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use》

怎么说呢，我认为如果把ICH Q6研究透彻了
再结合ICH Q8的思想，再结合具体一些细节文章，这类问题很容易解决。





8495dft12_09.pdf(161.35k)
EP7-2031E.pdf(107.63k)
ptc_mab.pdf(140.18k)
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则2003.zip(13.33k)
Q6b测试方法和接受标准：生物技术和生物药品英文199903.PDF(54.0k)

谈下自己对这个标准的认识，可能有不对的地方。请指正！
?Protein Concentration ----------------------70.9 mg/mL [63.0 -77.0] 该项目是检测蛋白浓度，可以用常规的
Folin－酚试剂法（Lowry法），因为测定是总蛋白浓度，所以不能作为鉴定、生物活性的评判
? Potency ---------------------- 100% [80 -125%] 该项目主要针对抗体药物的生物活性，可以用ELISA，或其他基于细胞的检测方法。
? ID (immunoassay) ---------------------- Pass 鉴定项目使用了免疫学方法，目前最简便、快捷的当属ELISA，其原理是特异性的抗原-抗体结合作用。
? SE-HLC ----------------------- MP: 99.8 %, HMW: 0.2 %, LMW: 0.0% [MP ≥ 99 %] 该项目俗称纯度，主要是为了检测制剂中的聚体（HMW 大分子物质），降解（LMW 小分子物质）。
SE-HLC应为 SE-HPLC即分子筛，这种方法能够根据分子量进行分离。但是，若要重点分析聚体，SE-HLPC也有其局限性。
? CE-SDS,reduced ----------------------HC+LC: 98.9 %, HC: 66.8 % LC: 32.1 % [LC+HC ≥ 98%]
CE是毛细管电泳；reduced是还原，能够打开轻链、重链。目前，国内用的较多的还是SDS-PAGE，毛细管电泳一般生产厂家购买的不多。后者与前者相比，在于能够高通量、更为精确、快速！
? CEX-HPLC ----------------------- MP: 89.6 %, Acidic: 2.7 %, Basic: 7.7 % [≥ 80%]
该项目是使用阳离子交换色谱检测主带、酸性变异、碱性变异的比例。这其实关注的是，抗体的电荷变异。这里多说一点，多种化学修饰都会引起抗体分子等电点的改变。如抗体分子的脱酰胺化、唾液酸化、重链C段赖氨酸清除造成偏酸电荷变异，赖氨酸/甘氨酸酰胺化反应、甲硫氨酸氧化作用等碱性电荷变异143（该文尚未发表）
? CEX-HPLC ID ----------------------- Pass
同上，用于鉴定
? Osmolality ----------------------- 314 mOsm/kg [300 ± 50]
这是渗透压，影响该项目的主要是制剂配方。
? pH ---------------------- 5.2 at 24.6°C [5.0 – 5.4]
不说了。
? Appearance ----------------------- Report
外观，不说了。
? Volume ----------------------- 1.2 mL (average 1.1525 mL, n = 5) [≥ 1 mL]
不说了。
? Sub-visible Particulate ---------------------- 29 particles/container ≥ 10 μm [no more than 6000]
这个不知道业内怎么称呼？求解。
3 particles/container ≥ 25 μm [no more than 600]
不说了。
? Sterility -------------------------------------- Pass
无菌，不说了
? Bacterial Endotoxin ----------------------- < 0.2 EU/mL [≤ 5.0]
内毒素，多用鲎试剂法
? CHOP ELISA ----------------------- 4.4 ppm
宿主蛋白，ELISA测定
? Protein-A ELISA -----------------------< 0.5 ppm
protein A 是纯化的第一步，可能有泄漏的可能，所以也要检测。
? DNA QPCR ----------------------- < 1pg/mg
宿主DNA，不说了，做重组蛋白药的都要测。
以上各项指标基本是反映了对抗体药物最终产品的质量要求，用到的一些方法也比较的明了，可以作为抗体药物开发的参考。
版主zhulikou431留言:
感谢热情讨论，但是注意，申诉不要太着急。

质控其实分为两个层次：抗体的定性研究(characterization主要是临床前报批资料里）和批次放行（lot releast test主要体现着每批制剂的相关检验，也就楼主所说）
再深一个层次，则是FDA更为关注的是关键质量属性，Critical quality attributes，这个需要根据临床药效学和上市后的临床数据确定。
相关背景资料可以参考我的帖子
我国抗体产业、抗体产业关键技术综述 老帖20130525更新 免蚁豆 - 蚂蚁淘论坛
觉得有道理，不要吝啬投票。

这个只是检测结果，不是质量标准吧。

严格的讲，质量标准是检测方法和检测指标的组合物。

有些公司图省事，也把简单指标列一列，作为质量标准的。

质控其实分为两个层次：抗体的定性研究(characterization主要是临床前报批资料里）和批次放行（lot releast test主要体现着每批制剂的相关检验，也就楼主所说）
再深一个层次，则是FDA更为关注的是关键质量属性，Critical quality attributes，这个需要根据临床药效学和上市后的临床数据确定。
相关背景资料可以参考我的帖子
我国抗体产业、抗体产业关键技术综述 老帖20130525更新 免蚁豆 - 蚂蚁淘论坛
觉得有道理，不要吝啬投票。

谈下自己对这个标准的认识，可能有不对的地方。请指正！
?Protein Concentration ----------------------70.9 mg/mL [63.0 -77.0] 该项目是检测蛋白浓度，可以用常规的
Folin－酚试剂法（Lowry法），因为测定是总蛋白浓度，所以不能作为鉴定、生物活性的评判
? Potency ---------------------- 100% [80 -125%] 该项目主要针对抗体药物的生物活性，可以用ELISA，或其他基于细胞的检测方法。
? ID (immunoassay) ---------------------- Pass 鉴定项目使用了免疫学方法，目前最简便、快捷的当属ELISA，其原理是特异性的抗原-抗体结合作用。
? SE-HLC ----------------------- MP: 99.8 %, HMW: 0.2 %, LMW: 0.0% [MP ≥ 99 %] 该项目俗称纯度，主要是为了检测制剂中的聚体（HMW 大分子物质），降解（LMW 小分子物质）。
SE-HLC应为 SE-HPLC即分子筛，这种方法能够根据分子量进行分离。但是，若要重点分析聚体，SE-HLPC也有其局限性。
? CE-SDS,reduced ----------------------HC+LC: 98.9 %, HC: 66.8 % LC: 32.1 % [LC+HC ≥ 98%]
CE是毛细管电泳；reduced是还原，能够打开轻链、重链。目前，国内用的较多的还是SDS-PAGE，毛细管电泳一般生产厂家购买的不多。后者与前者相比，在于能够高通量、更为精确、快速！
? CEX-HPLC ----------------------- MP: 89.6 %, Acidic: 2.7 %, Basic: 7.7 % [≥ 80%]
该项目是使用阳离子交换色谱检测主带、酸性变异、碱性变异的比例。这其实关注的是，抗体的电荷变异。这里多说一点，多种化学修饰都会引起抗体分子等电点的改变。如抗体分子的脱酰胺化、唾液酸化、重链C段赖氨酸清除造成偏酸电荷变异，赖氨酸/甘氨酸酰胺化反应、甲硫氨酸氧化作用等碱性电荷变异143（该文尚未发表）
? CEX-HPLC ID ----------------------- Pass
同上，用于鉴定
? Osmolality ----------------------- 314 mOsm/kg [300 ± 50]
这是渗透压，影响该项目的主要是制剂配方。
? pH ---------------------- 5.2 at 24.6°C [5.0 – 5.4]
不说了。
? Appearance ----------------------- Report
外观，不说了。
? Volume ----------------------- 1.2 mL (average 1.1525 mL, n = 5) [≥ 1 mL]
不说了。
? Sub-visible Particulate ---------------------- 29 particles/container ≥ 10 μm [no more than 6000]
这个不知道业内怎么称呼？求解。
3 particles/container ≥ 25 μm [no more than 600]
不说了。
? Sterility -------------------------------------- Pass
无菌，不说了
? Bacterial Endotoxin ----------------------- < 0.2 EU/mL [≤ 5.0]
内毒素，多用鲎试剂法
? CHOP ELISA ----------------------- 4.4 ppm
宿主蛋白，ELISA测定
? Protein-A ELISA -----------------------< 0.5 ppm
protein A 是纯化的第一步，可能有泄漏的可能，所以也要检测。
? DNA QPCR ----------------------- < 1pg/mg
宿主DNA，不说了，做重组蛋白药的都要测。
以上各项指标基本是反映了对抗体药物最终产品的质量要求，用到的一些方法也比较的明了，可以作为抗体药物开发的参考。
版主zhulikou431留言:
感谢热情讨论，但是注意，申诉不要太着急。

说实话，标准这个东西，
如果讨论格式
中文就看中国药典3部
国外就看EP/USP就可以了

如果要讨论研究技术，ICH Q6A和Q6B，才是研究的核心

当然，《药品标准工作手册》和EP的那些技术指南，都是很有帮助的。

讨论格式，真的很小儿科了。