【求助】免疫组化的同型抗体阴性对照是不是这样做？...

【求助】免疫组化的同型抗体阴性对照是不是这样做？

如果我修改的和专家建议的意见不一致，不做同型对照而是做用PBS代替一抗的对照，会不会拒稿呀？多谢各位了！

谈一点自己的拙见。
广义的阴性对照包括：
1）空白对照　 第一抗体由PBS取代。
2）严格的阴性对照用已知的确定不表达你所要检测的抗原的其他组织的切片做阴性对照
3）回收实验阴性对照　已知抗原与相应的第一抗体混合，发生结合沉淀，再用此沉淀抗体复合物进行免疫组化实验，结果为阴性。
4）同型抗体替代对照　用于第一抗体同种动物的血清或非免疫IGg代替第一抗体结果为阴性。
5）自身对照　在同一切片上，应将不同组织成分中的阴性结果与检测的目的物对照比较
不过目前绝大多数人都是用PBS来代替一抗作为阴性对照，其实质是空白对照，因为这样做如果结果是阴性，也只是排除了二抗引起的非特异而已，但至于一抗是否会产生非特异，那只通过空白对照是不得而知的。因此你就必须做严格意义上的阴性对照。
但问题又来了，如果你能找到确定不表达你所要检测的抗原的其他组织来做阴性对照那最好了，但事实上有时很难找到这样的片子，比如有些因此几乎在所有的组织中都有表达，那这样你就无法找到这样严格的阴性片了。
这时你就可以选择同型抗体替代对照：用于第一抗体同种动物的血清或非免疫IGg代替第一抗体结果为阴性。比如你所说的，如果一抗是鼠抗人的，那么你就可以用鼠的血清或者非免疫IGg来代替一抗（因为理论上，这样的替代，两者之间是不会发生反应的，结果应该是阴性的），如果这样做出来的结果是阴性的，那么再加上你的空白对照结果也是阴性的，你就可以说排除了一抗，二抗的非特异，你的阳性结果是真实可靠的，当然了，如果够严格，还要加上阳性对照，这样就完美了。一般要验证阳性结果，那么阴性对照必不可少；如果要验证阴性结果，那么阳性结果必不可少。另外，所有的阴性对照，阳性对照，只有在你同步实验的前提下才有意义，不同步的，后来补加的对照实验都是毫无意义的。
至于你所说的：不做同型对照而是做用PBS代替一抗的对照，会不会拒稿。那么就完全取决与审稿专家的意见了，不过既然专家已经给你说明了要做严格意义的阴性对照了，看来这个专家还是很严格的，很看重这样严格阴性对照的，因此你最好还是按照专家的意见来做严格的阴性对照吧。
以上拙见，互相交流。祝好！

非常感谢泡泡这么详细的回复，一个多月没有上网了，很高兴看到这些，问题已解决，再次感谢!

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haidi1214
请教：
投稿修回意见中有一条是：应该附加上同型抗体的阴性对照结果。我做的免疫组化图片专家建议要做同型抗体的阴性对照。我知道有用PBS做阴性对照的，但不知这个同型抗体的阴性对照该怎么做？
举例：如果我的一抗是鼠抗人的，那么是不是用鼠的血清代替一抗就是同型抗体的阴性对照了？还是用别的什么抗体代替一抗呀？ 非常感谢！

......

老师您好，请问您最后是怎么解决这个问题的啊？我是用PBS做的阴性对照，结果编辑说我的不科学，应该做同型对照：Control reactions to immunohistochemical staining with the use of monoclonal antibodies require a staining with a
monoclonal antibody of irrelevant specificity but with the same isotype as the specific antibody。您是用的PBS还是同型抗体补加的实验，恳请指教，谢谢！