流式三色荧光怎么选不用做补偿...

流式三色荧光怎么选不用做补偿

三色抗体命名为A、B、C
同型对照（阴性对照）管：A同型+B同型+C同型
单阳性对照
A检测管：A+B同型+C同型
B检测管：B+A同型+C同型
C检测管：C+A同型+B同型
不存在荧光重叠的两个抗体不需要调节补偿。

样本为PBMC，想用三色标记Treg细胞，分别为CD4-PECY，CD25-Fitc，Foxp3-PE，想知道如何设置荧光补偿，用的是BD的流式仪，1、是设置阴性管一个，单阳性管每种一个，样品管一个么？

荧光素强度依次为PE， PECY5 APC FITC, PE最强，FITC最弱。 所以，建议抗体组合为：
Foxp3-PE，CD4-FITC，CD25-PECy5.5或者CD25-APC。
同时购买三个相应的同型对照抗体。
样品管设置如下：
1. cell + FITC-isotype + Pecy5.5（ or APC）-isotype + PE-isotype
2. Cell + FITC-isotype + CD25-mAb + PE-isotype
3. Cell + PE-mAb + FITC-isotype + Pecy5.5（ or APC）-isotype
4. Cell + CD4-FITC + Foxp3-PE + CD25 -PECy5.5( or APC)。 [这一管的数据可以拿来分析用]。

在充分了解调整电压和补偿原理的基础上，也可以做一些简化。如果不太懂，就按照这个来。其中Foxp3的抗体和同型对照抗体都是在固定破膜以后再加，不是与CD4或者CD25同时加。