【求助】核表达的抗体，为何是这样的?...

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【求助】核表达的抗体，为何是这样的?

举报 2015-11-22 20:41

这两张图上都没看到明显的核表达。试过热修复没有。我做过对照，核指标用EDTA修复液微波热修复，效果比枸橼酸和PBS好很多。酶消化的修复方式还是主要用于浆膜的指标

举报 2015-11-16 03:16

试试热修复。

谢朗	举报 2015-11-22 10:05 Justin001 这两张图上都没看到明显的核表达。试过热修复没有。我做过对照，核指标用EDTA修复液微波热修复，效果比枸橼酸和PBS好很多。酶消化的修复方式还是主要用于浆膜的指标请问前辈你的EDTA微波热修复的具体操作过程是怎么样的？

谢朗	举报 2015-11-18 05:36 qq693056322 试试热修复。前辈你好，这个指标我也试过枸橼酸高温高压修复，它表达的位置与上述图片中的差不多，但背景色更深，表达的特异性不够好，还有，这个复合酶修复后的片子好像苏木素复染的时候，不太上色，不知道这其中有什么门道？谢谢前辈的回复

举报 2015-11-17 03:54

谢朗
请问前辈你的EDTA微波热修复的具体操作过程是怎么样的？

用EDTA修复液，配方网上有很多，查一下就可以了，嫌自己配麻烦市面上也有现成的卖，我做实验对照的时候查到武汉博士德公司有卖的。使用方式就跟PBS或枸橼酸的使用一样，浆组织浸没，微波炉高火至沸腾维持两三分钟，冷却几分钟之后再加热至沸腾（就是反复两次或多次），再冷却至室温

举报 2015-11-16 23:38

不止是没有核阳性，感觉都是纤维着色哦～

举报 2015-11-23 10:42

Justin001
用EDTA修复液，配方网上有很多，查一下就可以了，嫌自己配麻烦市面上也有现成的卖，我做实验对照的时候查到武汉博士德公司有卖的。使用方式就跟PBS或枸橼酸的使用一样，浆组织浸没，微波炉高火至沸腾维持两三分钟，冷却几分钟之后再加热至沸腾（就是反复两次或多次），再冷却至室温

EDTA修复液之前已经购买了，不过之前做的都是柠檬酸高温高压，微波修复没做过，查了一番资料，发现大家的做法也不太一样，所以具体操作也不知怎么样。另，是不是把温度维持在98度左右15分钟，就算达到热修复的要求了，那这样的话，用水浴法是不是来的更温和，可控性也更强？

谢朗	举报 2015-11-22 03:47 wenshl2005 不止是没有核阳性，感觉都是纤维着色哦～有道理，因为有另一个抗体的表达有时候也与这有些相似，纤维着色的原因一般是为什么？感觉它的特异性还很好啊，哈哈。谢谢老师的关注与回复

举报 2015-11-19 18:44

水域微波均可，主要是控温。多试几个条件做好对照。

举报 2015-11-15 12:53

谢朗
有道理，因为有另一个抗体的表达有时候也与这有些相似，纤维着色的原因一般是为什么？感觉它的特异性还很好啊，哈哈。谢谢老师的关注与回复

具体原因我也不清楚。酶修复我只做过一次，当时背景有点儿高，舍弃了。
建议多用集中抗原修复方法试试（柠檬酸盐、EDTA等）刚刚瞟了一眼这个基因相关的文章，胚胎中的蛋白丰度应该还是挺高的。

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