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2017-10-06 20:45
核蛋白提取:
细胞经PBS洗涤后,悬浮在缓冲液A中 即10mM HEPES,pH 7.9,10mM KCl,0.1mM EDTA,0.2% NP40,1mM DTT,0.1mM PMSF,1mg/L Leupeptin、antipain、aprotinin和pepstatin. 混匀后冰置15min,加入10% NP40 25微升 剧烈震荡15秒,13000 rpm离心10秒 吸弃上清,加入缓冲液C 即20mM HEPES,pH 7.9,420mM NaCl,0.1mM EDTA,1.5mM MgCl,25% Glycerol,1mM DTT,0.1mM PMSF,1mg/L Leupeptin、antipain、aprotinin和pepstatin. 冰置30min,剧烈震荡15秒,12500rpm离心10分钟取上清 |