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2004-05-23 14:58
您看此法可行不?
用环孢菌素α(抑制NFATc1去磷酸化及核异位,但不抑制基因表达)处理细胞12h,提取胞浆部分裂解液,用NFATc1特异抗体进行免疫沉淀,提取物为a(磷酸化的NFATc1)。提取BPs处理和非处理全细胞裂解液(不用环保菌素α处理),用Calcineurin特异抗体进行免疫沉淀,提取物分别为b和c。取等量b和c分别与等量的a在37℃孵育4h,然后用磷酸化的PKA(蛋白激酶A)底物特异性抗体进行 Western blotting 检测,分析ALN处理组和非处理组磷酸化NFATc1的差异,评价BPs对Calcineurin活性的影响 |