收藏  |   举报 2006-11-16 20:28   关注:260   回答:6

【求助】关于线粒体提蛋白的问题...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-11-23 23:58
【求助】关于线粒体提蛋白的问题
举报 2006-11-16 22:50
裂解液和样品的比例是多少
举报 2006-11-19 11:37
提出脑线粒体后,从你裂解液的配方看,你是想做双向电泳吧。
上面的配方适合提取线粒体总蛋白,但是要注意几点:
1。加入裂解液后,最好在冰浴中静置10-20分钟,使线粒体膜被充分裂解。
2。最好在加入裂解液后超声,100W,6s,4次,这样可大大增加线粒体内蛋白的释放。但功率不能太大,否则部分蛋白会降解。
3。最好用25000g离心,一般30min-60min内均可。
4。加入裂解液的量,决定你最终的样品液浓度。一般200-400ul就行了。当然,你最好制得样品后立刻定量,再根据你2DE的上样量将蛋白分装保存。
举报 2006-11-27 15:27
我是提线粒体跑2-D

请问是不是次序是这样的:加入裂解液--然后冰浴10-20分钟--然后超声--然后25000g离心,30min-60min。
举报 2006-11-18 04:01
是的。
祝实验顺利。
举报 2006-11-19 18:30
谢谢DIGE!这星期就要进实验室了,很紧张!总担心做不好!谢谢你得帮助!
举报 2006-11-21 12:18
你好,楼主!我也想买载体两性电解质PH3-10,可是问了几家公司,他们25ml都要三千多元,而且没有分装。
我想请问楼主,你们的是那家公司定的,有分装的吗,大概价格多少。
谢谢!
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