【求助】关于RNA提取中的试剂...

【求助】关于RNA提取中的试剂

rna提取，一般步骤原理都是，先裂解细胞，然后在去蛋白，脂肪，多糖等杂质。
氯仿，是一种变性剂可以让蛋白变性达到去除的作用，也是一种增加溶液比重，通过离心，让溶液分层的作用。
异丙醇可以容核酸。分层。
上清一般为核酸溶液，中间层大多为蛋白，下层就是密度比较大脂肪等的杂质。

展开引用

饼干糖果
我是个初学者，有很多问题。请大家指教。
1、RNA提取为什么用异丙醇，而且是等体积的？
2、为什么用氯仿，RNA为什么在上清中，中间和下层分别有什么？
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗，而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗，会使水分快速蒸发，可行吗？
谢谢大家啦，帮帮忙。

......

1.异丙醇是沉淀核酸用的。不一定非得等体积。多点没关系。有机溶剂，跟水互溶，与水结合后，核酸由于不能被电离就沉淀出来了。
2.为何用氯仿有点忘了。中间层是蛋白，下层是有机相应该是DNA。站内搜索一个‘雾都孤儿’的贴，写的很详细，很不错的。
3.用75%乙醇洗是由于RNA中还有很多盐离子，用75%能溶解其中的离子，如果是100%的乙醇，则没啥意义，离子洗不掉，就不叫洗了。用75%的洗了之后用无水的再洗可以加速蒸发。

LS正解。
2. 氯仿可是蛋白变性，且比水重，离心后在最下层，里面主要含有蛋白。上层是水相，里面含有RNA和少量的DNA，中间层是DNA。因为RNA和DNA的溶解度不同，因此RNA在上层水相，DNA在中间层