如何防止内源性RNA酶对RNA的降解...

如何防止内源性RNA酶对RNA的降解

1. 使用正确的细胞或组织储存条件
　　在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。
　　RNAfixer使样品储存更为便利。储存在RNAfixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。
　　2. 消除环境RNase的污染
　　为了得到完整的、高品质RNA，在整个RNA制备过程中，当RNA离开强蛋白变性剂（如离液裂解液或酚）的保护时，避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase几乎是无所不在，所以必须确保与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备，都必须用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过，去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。必须保证一直使用无RNase的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换。