收藏  |   举报 2018-01-22 16:00   关注:266   回答:4

【交流】阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CR...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-12-22 14:58
【交流】阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法
举报 2018-01-30 05:51
关注一下
举报 2018-02-03 03:55
确实不错。谢谢分享
举报 2018-01-27 22:58
分析敲除位点的上下游序列,设计合适的引物PCR扩增目的基因片段,与野生型目的基因杂交后CruiserTM酶切15-20分钟,酶切产物1.5%-2%凝胶电泳。
请问一下,如何做到与野生型的目的基因杂交??
举报 2018-01-26 06:07

T7 核酸内切酶 I 识别双链DNA

首先提基因组,有突变的基因,也有未突变的

第二,利用基因组进行PCR,得到突变的带型和未突变的野生型带型

第三,在将PCR产物进行变性,再复性,变性,再复性........几个循环后,就可以得到野生型和突变型的杂交带,杂交带中含有错配的碱基

第四,再用T7 核酸内切酶 I 作用,识别错配碱基进行切割。


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