crispr/cas9 实验设计...

那么后续你选择性的做个分选rfp 阳性细胞。可以先做个wb检测蛋白的表达有没有下去.然后再根据你的测序结果判断的移码突变的比例，分单细胞到96 孔板，然后扩大培养，比如，你的移码突变做出来是40%。那么十个扩大培养里面就有四株是ko的。可以再做wb检测。

先设计sgRNA，买Crispr质粒，把sgRNA克隆到质粒里，然后转染细胞，然后进行PCR，看有没有敲除。

kangaroo0513

先设计sgRNA，买Crispr质粒，把sgRNA克隆到质粒里，然后转染细胞，然后进行PCR，看有没有敲除。

那么后续你选择性的做个分选rfp 阳性细胞。可以先做个wb检测蛋白的表达有没有下去.然后再根据你的测序结果判断的移码突变的比例，分单细胞到96 孔板，然后扩大培养，比如，你的移码突变做出来是40%。那么十个扩大培养里面就有四株是ko的。可以再做wb检测。

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sicaujj

那么后续你选择性的做个分选rfp 阳性细胞。可以先做个wb检测蛋白的表达有没有下去.然后再根据你的测序结果判断的移码突变的比例，分单细胞到96 孔板，然后扩大培养，比如，你的移码突变做出来是40%。那么十个扩大培养里面就有四株是ko的。可以再做wb检测。

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柳清扬

然后就有个小问题，如果突变点太小，不影响蛋白表达，或者说WB检测不出，会不会存在这样的可能？

柳清扬
怎么是focus在移码突变？不太懂，我的感觉就是有蛋白，分选就有信号，WB就有条带，是不是？但是分选没信号就一定是crispr有作用吗？而且这样是在验证其切割效率，只要有切割就能证明它work了吗？