通过CRISPR/Cas方法敲除细胞内的一个基因，能通过设计...

你有敲除相关的信息吗，比如当时的测序结果，到底敲掉的是哪里，掉了几个碱基之类的，如果什么都不知道的话，直接用引物PCR，可能不管敲没敲掉都是可以P出来的而且带比较相近，区分不出来，如果有相关信息，就在敲掉的位置设计引物，看是否能达到WT能P出来，KO组p不出来。

liuzz2016

如题，简单的说就是我现在有一个gene A敲除的细胞株，其他人敲除的，我没这个A的抗体，想用PCR的方法来检测敲除效果。此法可行否？

sicaujj

p出来条带送测序。

这个PCR产物必须覆盖到突变位点？也行

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午后的红太狼

你有敲除相关的信息吗，比如当时的测序结果，到底敲掉的是哪里，掉了几个碱基之类的，如果什么都不知道的话，直接用引物PCR，可能不管敲没敲掉都是可以P出来的而且带比较相近，区分不出来，如果有相关信息，就在敲掉的位置设计引物，看是否能达到WT能P出来，KO组p不出来。

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如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除，因为突变范围小，在敲除的位点上设计引物做PCR，会不会照样能P出来。 简单的说，可能就删掉一个碱基，会影响到20个bp长的引物的PCR么？ 求指点。

liuzz2016

如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除，因为突变范围小，在敲除的位点上设计引物做PCR，会不会照样能P出来。 简单的说，可能就删掉一个碱基，会影响到20个bp长的引物的PCR么？ 求指点。

sicaujj

p出来条带送测序。

这样果然是最简单的办法，是我想复杂啦

liuzz2016

如果是单基因突变或敲除造成的密码子移位导致的敲除，因为突变范围小，在敲除的位点上设计引物做PCR，会不会照样能P出来。 简单的说，可能就删掉一个碱基，会影响到20个bp长的引物的PCR么？ 求指点。

只有1个碱基的话，不会影响PCR的结果

sicaujj

p出来条带送测序。

你好，我想问一下，我P出来后直接送测序就可以了吗？

还需要提供其他的哪些信息吗？

sicaujj

p出来条带送测序。

测序的引物该提供什么呢？