荧光定量pcr三步法反应条件怎么设置...

荧光定量pcr三步法反应条件怎么设置

三步法PCR 首先95°C 作用3 min。 PCR 进行 35 个循环。 步骤 温度 变性 95°C 退火 58°C 延伸 72°C 时间 30 秒 30 秒 30 秒 融解曲线 温度 时间 变温速度 95°C 0秒 20°C/秒 55°C 15 秒 20°C/秒 95°C 0秒 0.1°C/秒 PCR 疑难解答 当 PCR 结果不甚满意时，首先检查以下几方面并遵照执行： 1 将 PCR 反应的试管与反应板紧贴。 2 当酶反应混合物以 70℃“热启动”开始循环时，切记在加入酶后稍 3 微振荡一 下，因为在 0.2-ml 的 PCR 管中不能均匀传热。 4 不要随意减少 dNTP 的用量， 它是一个系统的因素， 必须与其它成份保持平衡。