【求助】辣根过氧化物酶底物...

【求助】辣根过氧化物酶底物

你混匀的液体是要在HRP酶的催化下才能产生兰色的产物.

我知道，我包被的板上的就是辣根过氧化物酶标记的样抗兔的二抗。

问题出在前面抗原抗体的反应上，你可以进行多方验证逐个排除原因。验证底物的方法是直接往里面加酶，看是否显色。

这是我们实验室底物的配制方案效果很好,希望有借鉴意义.
底物液（TMB-过氧化氢尿素溶液）：①TMB液：TMB 200mg，无水乙醇（或DMSO）100mL，②柠檬酸缓冲液：Na2HPO4 14.6g，柠檬酸9.3g，加双蒸水至1000mL，调至pH 5.0～5.4；③过氧化氢尿素液：0.75%过氧化氢尿素　底物液配制为5.4ml三蒸水，6ml柠檬酸缓冲液，38.4μl 0.75%过氧化氢尿素，600μlTMB液，加底物时现用现配。

我发现是双氧水的问题，重新换了双氧水，虽然显色了，我用同样的抗体浓度试了一下，与使用试剂盒里的底物相比，颜色要淡很多，现在不知道要改进什么的浓度！