【求助】数字PCR...

有的时候是只有几百个，同一批实验有的油滴多有的少

我目前再用，做MIRNA的，跑了很对次了，微滴数很多（一般在1.2W-1.6W间），但结果总是不理想。 Q200技术说的1W一下不能用吧

周艳ing
请问论坛有做数字PCR的吗？为什么用外周血检测突变时，有扩增的微滴才几百个啊？大家一般有效微滴是多少个呢？

周艳ing
请问论坛有做数字PCR的吗？为什么用外周血检测突变时，有扩增的微滴才几百个啊？大家一般有效微滴是多少个呢？

外周血里面游离DNA的含量比较低，我们做的时候一般在200-400个拷贝每孔。有扩增的微滴就是几百个，这是正常的。但有效微滴数是看总的微滴数，这个一般要求大于1万个，主要是大于1万的结果更稳定可靠一些，小于1万的结果可能也对，但存在一定风险，可能会有偏差。

周艳ing
看来做ddPCR的比较少，用在外周血检测突变方面的更少了

周艳ing
请问论坛有做数字PCR的吗？为什么用外周血检测突变时，有扩增的微滴才几百个啊？大家一般有效微滴是多少个呢？

有扩增的微滴是指阳性微滴数，也就是表明这个样本中目的基因的拷贝数很低，这在外周血检测突变的实验中是很正常的。

有效微滴是指该体系中所有的微滴数，包括阴性和阳性微滴总数，你这个几百只是阳性微滴数，并不是有效微滴数（如下图所示，右上角需要进行勾选你需要查看的微滴类型，一般默认出来的是阳性微滴数）。建议有效微滴数，也就是total超过1w即可