收藏  |   举报 2016-12-08 19:14   关注:237   回答:7

百万火急,重组质粒酶切只有一条带,测序显示目的基因已连在载体...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-11-12 08:26
百万火急,重组质粒酶切只有一条带,测序显示目的基因已连在载体上,菌落PCR也可以P出目的条带,为什么双酶切只有一条带!!!!
举报 2016-12-14 10:07

Is the construct maxiprep sequenced? If it is, have you tried sequencing using primers the nucleotide sequence of which is derived from the insert DNA?


举报 2016-12-17 02:40

试过的,分别涉及两对引物,一对在插入的目的基因上,一对在载体上,做质粒PCR都可以P的出目的条带,但是再做双酶切,都只有一条带。

举报 2016-12-12 08:19

Can you find the two enzyme sites in the sequence data?

举报 2016-12-12 17:00
是不是连接后没有酶切位点?
我之前做的单酶切,连接目的基因后,又做的酶切,通过没有酶切成线性质粒,证明我的目的基因连接上了。跟你的思路完全相反。
仅供参考。
举报 2016-12-12 19:30

会不会是其中一个酶切位点发生了突变或者甲基化导致切不下来?

举报 2016-12-14 17:02

重新连接后的目的序列,经测序分析,双酶切位点都还在的。谢谢各位,已找到原因。

举报 2016-12-18 16:06
您好,我是新手,最近遇到了与你一样的问题,请问你是怎样找到问题所在的呢??
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