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Is the construct maxiprep sequenced? If it is, have you tried sequencing using primers the nucleotide sequence of which is derived from the insert DNA?
试过的,分别涉及两对引物,一对在插入的目的基因上,一对在载体上,做质粒PCR都可以P的出目的条带,但是再做双酶切,都只有一条带。
Can you find the two enzyme sites in the sequence data?
会不会是其中一个酶切位点发生了突变或者甲基化导致切不下来?
重新连接后的目的序列,经测序分析,双酶切位点都还在的。谢谢各位,已找到原因。