【求助】测序成功的重组质粒酶切后得不到目的条带...

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悬赏分：0 - 解决时间 2024-12-04 03:40

【求助】测序成功的重组质粒酶切后得不到目的条带

举报 2016-01-07 19:36

pGL3已经构建好了，并测序正确，为什么要酶切。另外，酶切位点是引物带的，只要引物合成没问题，一般不会有突变。还有就是，有的测序仪器会把两个相邻相同碱基读成一个信号，所以还要看看测序峰图，是否真的为一个碱基

举报 2016-01-03 14:05

ULYSSEESWB
pGL3已经构建好了，并测序正确，为什么要酶切。另外，酶切位点是引物带的，只要引物合成没问题，一般不会有突变。还有就是，有的测序仪器会把两个相邻相同碱基读成一个信号，所以还要看看测序峰图，是否真的为一个碱基

因为要中提上细胞，所以做个酶切鉴定一下。

测序峰图183、184位均有绿色的峰，但只测出一个碱基A，143位还有个黑色的峰G
请问这样的结果是测序的问题吗？酶切位点有没有问题呢？是否可以酶切？

举报 2016-01-04 13:41

正常来说，一般是先酶切后测序，测序结果正确就算构建成功了。其实pgl3连响应元件，就算酶切位点突变也没什么影响。至于峰图，还是有不少套峰，也许是质粒有污染，也可能是测序问题，建议换家测序公司

举报 2015-12-30 18:45

ULYSSEESWB
正常来说，一般是先酶切后测序，测序结果正确就算构建成功了。其实pgl3连响应元件，就算酶切位点突变也没什么影响。至于峰图，还是有不少套峰，也许是质粒有污染，也可能是测序问题，建议换家测序公司

嗯嗯，谢谢您的回复，今晚重复实验成功了

举报 2016-01-05 18:16

tdui
嗯嗯，谢谢您的回复，今晚重复实验成功了

举报 2016-01-04 00:46

楼主请问一下是怎么解决这个问题的，我连了目的基因，测序也是正确的，可是就是酶切一直没有目的条带，心累啊啊啊啊啊

举报 2016-01-02 00:23

Sapling_zhe
楼主请问一下是怎么解决这个问题的，我连了目的基因，测序也是正确的，可是就是酶切一直没有目的条带，心累啊啊啊啊啊

先看看测序结果里面酶切位点的地方有没有碱基突变或者缺失，再有根据目的基因与载体的碱基比例调整下酶切鉴定的体系，不行的话再把阳性克隆挑出来都酶切鉴定一遍，成功的再送测序吧，祝顺利~

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