目的片段双酶切后连接载体，测序结果是连反了，为什么会这样？...

How many clones are they sequenced? what is primer used in the sequencing? Can you show sequences at the Xho I and Kpn I junctions?

这个方法经常会出现这种问题的，我推荐你用同源重组的方法，它利用同源序列将目的片段定向的连在需要的位置，我们这边基本都换成这个方法了，我们实验室一直都在用诺唯赞的同源重组克隆试剂盒，推荐你试用一下，挺好用的。