【求助】求解：构建质粒时加了两个酶切位点，测序结果也显示存在...

【求助】求解：构建质粒时加了两个酶切位点，测序结果也显示存在，双酶切鉴定却未见切出条带

How big is the insert? What are the two enzyme sites? Do you have single enzyme digestion results?

mpark
How big is the insert? What are the two enzyme sites? Do you have single enzyme digestion results?

首先谢谢您的回复！
我用的是pGEMT载体3000bp
插入片段1300bp左右，
片段两边添加的是PmeⅠ 和XbaⅠ 这两个酶切位点，
我是用来做突变后再连入其他载体上的。
前几天也看见其他帖子里有说用单酶切，不过没鉴定过，打算再尝试一下。另外想请教下我会不会是碰到了甲基化的原因切不出来？

Try to use any enzyme that can cut cloned construct ( 3.0 kb vector plus 1.3 kb insert) only once and run gel long with the linearized 3.0 kb pGEMT.

XbaI会受到甲基化的影响。在前面存在某些序列的时候。