收藏  |   举报 2007-10-04 11:50   关注:258   回答:3

【求助】大公司的大鼠抗小鼠单克隆抗体检出好几条带,是不是同源...

已解决 悬赏分:0 - 解决时间 2024-12-30 03:28
【求助】大公司的大鼠抗小鼠单克隆抗体检出好几条带,是不是同源性太高了?
举报 2007-10-04 18:38
应该是抗体浓度太高了
相应降低下
举报 2007-10-05 08:47
感谢斑竹解答。我看到有些帖子提到过IgG重链(40-60kd)和轻链(15-20kd)的问题,我这会不会是抗大鼠IgG的二抗检测出了小鼠的IgG重链和轻链呢?
举报 2007-10-05 09:06
你先降低一抗二抗的浓度试一试,
如果26KD和54KD还有,而且很明显的话,
再做个阴性对照,只加二抗,不加一抗,如果还有条带的话,说明是二抗引起的

抗大鼠IgG的二抗是有可能检测到小鼠的IgG重链和轻链的,
因为IG的抗原性主要在constant region ,这些功能区不同物种间还是有一定同源性的
你的蛋白样品是不是来源于细胞的?
如果是,应该不会有ig,
除非是一些脾,血管,肝肾了什么组织,不排除这种可能性

补充一点,最近我师姐做大鼠肾组织的 WB,二抗用抗小鼠IgG,
总会在25和50KD的地方出现条带,她做的是肾纤维化模型
而且正常对照组条带淡,模型组条带浓,用药之后比模型又降低,
她以前做过不加一抗的 对照,这两条带总存在
推测是一些病理性IgG在肾组织内沉积。
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