【求助】FITC标记山羊抗小鼠IgG的浓度和时间...

【求助】FITC标记山羊抗小鼠IgG的浓度和时间

是其他步骤出问题了吧，二抗一般反应半小时就够了

snowmaia
各位同胞好，最近做免疫组化买了中杉的“FITC标记山羊抗小鼠IgG”二抗，说明书看的糊涂，做了一次组化，浓度是1：100，PBS稀释，时间25分，可是结果是阴性，什么都没有，突然觉得这个荧光素标记二抗是不是不能用DAB显色啊

你的问题有点与你标题不一致，且信息提供不够，目前分析如下：

1、荧光素标记二抗孵育后，用PBS浸洗后直接封片，即可在荧光显微镜下观察结果。

2、而DAB显色是酶免疫组化中的步骤，需要与过氧化物酶POD及过氧化氢一起进行反应，其中过氧化物酶一般是标记在二抗或三抗上的，而二抗与一抗进行反应——一抗与组织中抗原进行反应。

3、排除以上原因后，可能考虑一抗和二抗最佳稀释度的摸索和孵育时间的调整。

谢谢各位喽，最后发现是二抗错了，做的是酶免疫组化，买的是荧光法的二抗，难怪不出结果，(*^__^*) 嘻嘻……，惭愧哦