荧光绝对定量中标准品指的是什么，如何获取...

荧光绝对定量中标准品指的是什么，如何获取

荧光绝对定量中标准品：指用含有目的基因的质粒，知道质粒的分子量和浓度计算出拷贝数，然后倍比稀释就作为绝对定量的标准品。
　　获取：把目的基因p出来，然后接到质粒上，转染摇菌扩增，然后再抽质粒，酶切纯化。最后把纯化的目的基因做个鉴定。然后测定目的基因的量，计算出拷贝数。
　　荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
　　PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

标准品指的是已知拷贝数的核酸，简单点说就是已知量的DNA。

获取方法是通过一些仪器及方法测得DNA含量，换算成拷贝数，再进行梯度稀释，即可得到标准品

标准品一般情况下就是一直浓度的样品，不管是DNA也好，cDNA也好。一般就是整个实验室在做荧光定量时候都会使用这个样品。不过，要求不是很高，特别是在在相对定量的时候。在绝对定量是数据分析也有不同，毕竟还有标准曲线可以利用。