荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化...

荧光染料与多少dna结合肉眼可见颜色变化

碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA双螺旋中，可使荧光强度增加约20倍，以488nm波长激发，DNA/PI复合物最大的发射波长约为615nm。小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块，在培养皿内用PBS冲洗。(2).去除结缔组织及，剪碎肿块。(3).小碎片移入1.20×38mm针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL)，染色3LL细胞，于4℃存放20～30分钟。(5).测定580～750nm之间的发射荧光，以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。注：PI染色液：0.1%柠檬酸钠1000mL+PI 5mg + 1% Nonide P40水。2. 培养细胞DNA的流式细胞仪分析(1).从培养皿中吸去培养基，以HBSS冲洗二次。(2).加入PI5mL于培养皿中，在4℃放10分钟。(3).用吸管反复次打细胞，使细胞破坏，胞核释放出来，再行流式细胞仪分析。3. 完整细胞DNA的PI染色(1).70%乙醇固定的细胞悬液，离心，去固定液。(2).室温条件下加入PI染色一批细胞（105～106细胞/mL），时间为30分钟，然后行流式细胞仪分析。（二）吖啶橙染色1. DNA和RNA的鉴别染色利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定，非固定细胞核酸，或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果，但该方法已被许多实验室广泛采用。方法如下：1）试剂：（1）溶液A：低温保存，稳定期约2周。Triton X-100(0.1%) 0.1mL，1mol/L HCL 8mL1mol/L NaCL 15ml蒸馏水76mL，P