货号: | EK-R30978 |
样本: | 大鼠血清、血浆及相关液体样本含量 |
标记物: | 酶标记 |
适应物种: | Human/人 |
应用: | 请向客服索要说明书 |
检测方法: | 双抗夹心 |
检测限: | 详询 |
供应商: | 上海酶研生物 |
数量: | 现货 |
规格: | 96T/48T |
免疫测定的精确性可由酶标板孔之间的重复性和每次检测之间的重复性决定。由高CV值引起的低精确度一般由两个因素引起:移液操作和洗液操作。
我需要在孔内混合试剂吗?
◆ 当多种试剂滴加至一个孔内时(比如稀释液和样品),需要在孔内进行混合。滴加试剂和样品至每孔的中心,轻拍酶标板使其充分混合。
我的试剂/样品是粘稠状的,不易于吸取移动,怎么办?
◆ 在吸取粘稠液体时,请在待取液体中停留一段时间,待体积达到平衡后再移出。
◆ 用相应试剂预洗涤枪头以补偿液体的表面张力。
微量移液器
◆ 枪头中的液体体积不足或者不均匀,表明移液器需要被校准。检查移液器的功能,必要时重新校准。
◆ 在滴加试剂,标准品,样品时应及时更换枪头以避免互相污染。
◆ 检查枪头是否安装完好。如果安装不得当,可能会导致吸液和排出液体是体积不准确。
◆ 从容器中移出枪头时,将枪头轻靠在受液容器壁上移去残留在枪头外表面的液体。
正确洗板方法
◆ 如果使用自动洗板仪,抽吸装置或者多道移液器。确保每管都被适当抽吸。在孔内液体被完全抽走之后不要再将装置至于孔内过分抽吸。按照说明书所示重复以上步骤。最后一次洗板之后,将板内液体倾倒完全,用干净纸巾拍打表面并擦干。
◆ 洗板太快或者太慢,不完全洗板或者抽吸。
◆ 孔内干燥等各种因素都将影响检测结果的准确性。按照试剂盒内说明书迅速进行下一步实验操作。
我是否可以使用同一容器盛放所有的试剂?
◆ 不可以。请使用不同的容器盛放不同的试剂以避免污染。
◆ 有些待分析物对污染极其敏感(比如唾液,氧化试剂等等)。根据说明书,注意预防试剂盒内试剂污染。
我可以重复使用盖板吗?
◆ 再利用的盖板上可能含有上一步骤的残留物,可能会污染孔内现有的成分从而导致精确性降低。所以在每次孵育的时候使用新的盖板。很多因素都能影响标准曲线的结果,其中就包括制备和操作。
标准曲线(Standard Curve)
很多因素都能影响标准曲线的结果,其中就包括配制和操作。
我是否可以改变标准品的配制?
◆ 不可以。用指定的稀释液适当稀释的重组标准品如说明书中所示。
◆ 混合和溶解标准品时,应避免起泡。
◆ 溶解后的标准品最好静置至少15分钟(根据说明书)。在使用之前轻轻混匀,保证所有的固体已经溶解。
◆ 制作标准曲线时,确保所有的稀释步骤已经准确完成。稀释时注意及时更换枪头。在移液之前将稀释液充分混合。
洗涤方式怎样影响我的标准曲线?
◆ 不完全的洗涤会降低测定精确性,导致不理想的标准曲线结果。确保洗板机的正常工作,确保酶标板各孔被充分洗涤却不干燥。
移液方式怎样影响我的标准曲线?
◆ 不合理的移液操作会导致高CV值和不理想曲线。
◆ 在制作标准曲线的过程中,不正确的移液方式会导致错误的稀释,从而使错误的数值进入标准曲线中,或者产生非线性曲线。确保移液器正常工作。每孔中的液体体积不等可能就是移液器失灵或者枪头使用不当所致。
我的电脑软件不支持推荐的数据归纳方式,我是否可以用其它的?
◆ 可以,然而,每次测定最好使用说明书中推荐的数据归纳方式。使用不同的数据归纳方式会导致结果的浮动。
◆ 对于不同的计算机软件,将标准品的吸光度设定为Y轴,浓度设定为X轴。用对数纸作出的数据应该是线性的,回归分析被应用于对数变换。如果不能使用对数纸,则将浓度的对数和
OD值的对数进行线性作图。最适曲线由回归分析决定。
测定多个酶标板时是否可以使用同一条标准曲线?
◆ 在测定不同板中的样品时,每一个板都对应一条标准曲线。技术错误或者不同的孵育情况,环境条件都会引起酶标板之间产生不同结果。一条标准曲线测定的样品值必需是在相同环境下产生的,否则就是无效值。
我的标准曲线是平的或者是非线性的,这可能是由于什么原因引起的?
引起不理想的标准曲线的原因有很多,最常见的原因例举如下:
◆ 确定稀释是否得当。
◆ 确定波长是否正确。
◆ 标准品和样品必需在15-20分钟内滴加入板内。(除非试剂盒内说明书特别说明)
◆ 检查背景是否过高。
◆ 确定酶标板是否正确洗涤。不恰当的洗涤可能会引起具有高背景的平直曲线。
◆ 在测定过程中重复读板。在超过建议时间后读板会导致错误的结果。
◆ 如果最高的标准品的读数超过了酶标仪的范围,确定标准品是否正确溶解,孵育时间和温度是否准确。
◆ 为保证实验准确性请重复测定。
◆ 如果使用对照,对照的浓度必须在测定范围内。
◆ 在检测和孵育过程中确定试剂没有被污染。
◆ 没有任何信号的平直标准曲线可能是由于酶结合物或者底物没有反应。检查各个操作过程
◆ 由于许多酶标仪的限制,因此建议标准品检测由高向低做复孔。
酶研生物专注科研ELISA试剂盒,人、大鼠、小鼠等4000余种。细胞株、菌种、血清、细胞因子、,感谢您的信任。
更多细胞相关信息请登录官网:www.elisakits.cn查询,或者联系我们索取说明书!