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Carnoy固定液Ⅱ
D L-Sulforaphane
CA153抗体
[VIP第1年] 指数:2
通过南京市鼓楼区市场监督管理局认证 
Docosanol (Abreva)
CD19-set siRNA/shRNA
MCAT-set siRNA/shRNA| 货号： | EGF2000 |
| 数量： | 大量 |
| 保存条件： | 4度 |
| 供应商： | Enogene |
| 规格： | .5MG/0.5ml/1.0ml/1.5ml |
EnoGeneFec 2000 转染试剂
恩晶生物的EnoGeneFec™的系列转染试剂现可现货供应，进行6折促销，同时在这基础之上开展买任何转染试剂送抗体一只的活动：即购买1.5ml的转染试剂送100ug的内参或标签抗体；1.0ml的转染试剂送50ug的内参或标签抗体；0.5ml的转染试剂送30ug的内参或标签抗体。
详情请见：http://www.biomart.cn/47251/news/82396.htm
http://www.enogene.com.cn/InfoShow.asp?NewsId=31
同时恩晶生物隆重推出第一季系列铂金小规格抗体（常规抗体、内参和标签抗体），可申请试用装，并举行买一送一活动：即买100ug的抗体送30ug的内参或标签抗体，50ug的抗体送15ug的内参或标签抗体（除E1A开头的抗体外）。
详情请见： http://www.biomart.cn/47251/news/80771.htm
http://www.enogene.com.cn/InfoShow.asp?NewsId=30。
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产品介绍
EnoGeneFec™2000是针对贴壁细胞设计的转染试剂，可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的贴壁细胞转染效率可达80%以上。
EnoGeneFec™2000可以形成微小的（平均大小约100-400nm）单层脂质体，靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面，并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒，通过细胞"内吞作用"进入细胞，能吸收溶酶体的H+，在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活，保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后，复合体囊泡肿胀破裂，将DNA释放到细胞质中，实现基因转染。
EnoGeneFec™ 2000与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要表现为：
●转染效率很高，对大多数贴壁细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂
●细胞毒性低，需要转染较大剂量的DNA时，毒性明显低于其它常用转染试剂
●操作简单，以最短的时间完成转染，转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min
- 试剂盒组分
| 组分 | EnoGeneFec™2000 Transfection Reagent |
| EGF2000-500 | 0.5ml |
| EGF2000-1000 | 1ml |
| EGF2000-1500 | 1.5ml |
- 操作步骤（以6孔板为例）
- 转染前18-24小时使用完全培养基在6孔细胞培养板，每孔接种2ml细胞培液（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），约为1-3×105个细胞，转染前细胞密度应达到70－90%。若使用其他的培养板或培养皿，可以参照下表中提供的孔（或皿）表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™2000加量。
| 培养板 | 表面积 (cm2/孔or皿) | 可容纳培养基体积 （ml/孔or皿） | DNA（或其他核苷酸类成分）用量（µg） | EnoGeneFec™2000 用量 | 待加的无血清、无抗生素的培养基体积 |
| 96孔 | 0.3 | 0.1-0.2 | 0.2μg溶于20 μl 培养基 | 0.4-1.0 μl 溶于20 μl培养基 | 50μl |
| 24孔 | 2 | 0.5 | (0.2-)1 μg溶于25 μl 培养基 | 2-5 μl 溶于25 μl培养基 | 0.4ml |
| 12孔 | 4 | 1.0 | (0.5-)2.0 μg溶于100 μl培养基 | 4-10 μl 溶于100 μl培养基 | 0.6ml |
| 6孔 | 10 | 2.0 | (1.0-)5.0 μg溶于100 μl培养基 | 10-25 μl 溶于100 μl培养基 | 0.8ml |
| 35 mm | 10 | 2.0 | (1.0-)5.0 μg溶于100 μl培养基 | 10-25μl 溶于100 μl培养基 | 0.8ml |
| 60mm | 20 | 5ml | (3.0-)10.0μg 溶于500 μl培养基 | 20-50μl 溶于 500 μl培养基 | 2.4ml |
| 10-cm | 60 | 10ml | (8.0-)20.0 μg 溶于1.5ml培养基 | 40-100μl 溶于800μl培养基 | 6.4ml |
2. 转染复合物的制备：
溶液A：将5µg 质粒DNA（或其他核苷酸类成分）加入到100μl无血清、无抗生素的培养基，在1.5ml无菌EP管中混匀后，室温放置5分钟。
溶液B：EnoGeneFec™2000在使用前请震荡混匀。将10-25µl EnoGeneFec™2000加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中，在1.5ml无菌EP管中混匀，室温放置5分钟。
将溶液A加入到溶液B中，轻轻混匀，室温放置20分钟，获得约200μl转染复合物 （注：该转染复合物在室温下5小时内是稳定的）。
3. 将800μl 无血清、无抗生素的培养基加入到上述的200μl转染复合物中，轻轻混匀，获得约1.0ml转染复合物溶液。
4. 将培养板中的培养基弃去，将第3步获得的1.0ml转染复合物溶液加入到培养孔中覆盖细胞。
5. 于5-8小时后，弃去每孔中的转染复合物溶液，加入2.0ml完全培养基（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），37℃孵育转染细胞18-24小时
6. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染，于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），传代次日可以换用选择培养基。
- 注意事项
使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果，建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数，另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度，OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。
2. 转染细胞的要求
细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素，推荐使用在50代以内的细胞进行转染试验。要求在转染前24小时对细胞再次传代。
3. 血清的影响。
在EnoGeneFec™2000和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。
4. EnoGeneFec™2000的用量
为了达到更高的转染效率，对于接种细胞密度在70%-90%之间的样本，可通过预试验在EnoGeneFec™2000（μl ）∶DNA（μg ）=1∶1 - 5∶1之间选择最佳的比例。EnoGeneFec™2000（μl）∶DNA（μg）的推荐比例为2∶1或5：1。对于一般细胞，2：1即可获得理想转染效果；对于较难转染的细胞，建议使用5：1。
五、储存
EnoGeneFec™ 2000以1 μg/μl浓度液体形式提供，保存在4℃。常温运输。
保存期：一年
温馨提示：不可用于临床治疗。
