货号: | E1WP302 |
供应商: | Enogene |
数量: | 999 |
规格: | 50.0 |
(EnoGene™ SDS-PAGE Gel Preparation Kit)
一、产品介绍
SDS-PAGE凝胶配制试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制PAGE胶了。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。
本试剂盒约可配制10-50块常规大小的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。
二、试剂盒组份
组 份 | E1WP302 | 储存 |
30% Acr-Bis(29:1) | 100 mL | 4℃ |
1M Tris-HCl, pH8.8 | 100 mL | 4℃ |
1M Tris-HCl, pH6.8 | 25 mL | 4℃ |
10% SDS | 5mL | 4℃ |
Ammonium Persulfate(过硫酸铵) | 1g | 4℃ |
TEMED | 0.5mL | 4℃ |
可调移液器、垂直板电泳仪、双蒸水
四、操作步骤
1、 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶):
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50-150kD |
8%胶 | 30-90kD |
10%胶 | 20-80kD |
12%胶 | 12-60kD |
15%胶 | 20kD以下 |
注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
贮液(ml) | 分离胶中丙烯酰胺的终浓度(%) | ||||
6 | 8 | 10 | 12 | 15 | |
蒸馏水 | 6.0 | 5.0 | 4.0 | 3.0 | 1.5 |
30% Acr-Bis(29:1) | 3.0 | 4.0 | 5.0 | 6.0 | 7.5 |
1M Tris-HCl, pH8.8 | 5.7 | 5.7 | 5.7 | 5.7 | 5.7 |
10% SDS | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
10%的过硫酸铵 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
TEMED | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
3、 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶):
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
5%胶 | 2 | 3 | 4 | 6 | 8 | 10 |
蒸馏水 | 1.4 | 2.1 | 2.7 | 4.1 | 5.5 | 6.8 |
30% Acr-Bis(29:1) | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 1.0 | 1.3 | 1.7 |
1M Tris-HCl, pH6.8 | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.75 | 1.0 | 1.25 |
10% SDS | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
10%的过硫酸铵 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
TEMED | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 |
五、注意事项:
1、 所过硫酸铵配制成10%溶液后,应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。
2、 TEMED宜避光保存。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 请穿实验服并戴一次性手套操作。
4、
六、保存条件:
1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (过硫酸铵) 粉末和1M Tris-HCl, pH6.8室温或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。
过硫酸铵配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解,1g中9ml蒸馏水溶解),分装成小管-20℃保存,通常半年内有效。
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