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免疫印迹技术服务(Wes| 提供商： | 上海吐露港生物科技有限公司 |
| 服务名称： | 引物延伸实验 |
| 规格： | 每个基因，每个样本 |
服务简介
Primer Extension可以用来精确鉴定转录的起始位点；类似的方法还包括S1 mapping，5'-RACE等。相比而言，Primer Extension更直接、也更精确；但是对实验技术的要求也更高。简单来说，就是在靠近转录产物5'端的位置设计一条反向的引物（引物末端标记），然后与总RNA做杂交，并进行逆转录；最后通过测序胶电泳检测逆转录产物。为了精确定位转录起始位点（即逆转录产物的长度），还需要利用这条标记的反向引物进行Sanger法测序，并同样进行测序胶电泳来作为ladder。由于整个过程（包括样本收集、RNA抽提、引物退火杂交、逆转录等）都不能有丝毫的RNA降解，所以对其中每一步的操作要求都非常高，否则得到的结果就有可能不是一个位点（多个位点或者一片）或者是假的位点。此外，不是每个转录产物都能够鉴定出转录起始位点，比如有些转录本的丰度特别低就很可能做不出的。
吐露港目前开发出了荧光标记法结合ABI测序仪来鉴定转录起始位点的方法；希望能够为您的实验带来帮助。
服务流程
样本要求
1. 样本要以最快的速度冻存在液氮、干冰中，然后转移到-80度；干冰运输。
2. 不要用市售的RNA稳定剂保存，然后置于常温。
3. 您可以提供抽提好的RNA，我们收到后会进行质检；如果不过关，则不会进行下一步的Primer Extension实验。
4. 建议在做Primer Extension之前，先做RT-PCR以了解该转录本在该处理条件、该处理时间下的转录情况。
服务收费
| 项目名称 | 费用（人民币） | 周期（工作日） |
| RNA抽提 | 1000/样品（非kit抽提，最多3数；含质检费用） | 5 |
| 质检 | 300/样品/次 | 3 |
| Primer Extension | 15000/基因/样本（含所有费用，如荧光引物定制等） | 20（定制荧光引物耗时长） |
| 数据处理 | 免费 | 5 |
ToloBio技术支持发表的论文
Jie Ren, Yu Sang, Yongcong Tan, Jing Tao, Jinjing Ni, Shuting Liu, Xia Fan, Wei Zhao, Jie Lu, Wenjuan Wu, Yu-Feng Yao (2016)
Acetylation of Lysine 201 Inhibits the DNA-Binding Ability of PhoP to Regulate Salmonella Virulence. PLOS Pathogens . DOI:10.1371/journal.ppat.1005458
