货号: | KL-GS-0030 |
保存条件: | -80℃ |
规格: | 100μl |
1、本产品采用干冰运输,收到后请直接冻存于-80℃冰箱。2、取冻存于-80℃的100μl感受态细胞于冰上融化;3、加入1μl纯质粒,轻轻吹打混匀,冰浴30min;4、将菌液放入42℃水浴中热激45sec,立即放入冰浴中2min;5、加入900μl SOC/LB培养基,于37℃恒温摇床上150rpm×45min温育;6、将菌液5000rpm×5min离心,弃尽上清;7、取100μl新鲜LB培养基将菌体打散,均匀涂布于对应抗性平板表面;8、平板可先正向37℃放置1h,待液体吸收完毕,再倒置37℃培养过夜。
基因型
F– ompT gal dcm hsdSB(rB- mB-)(DE3)
菌株介绍
过表达C41(DE3), C41(DE3) pLysS, C43(DE3), and C43(DE3) pLysS感受态细胞宿主菌能够有效表达来源于各个物种包括细菌,酵母,植物,病毒和动物等多个物种的有毒蛋白。该系列宿主菌基因中含有突变,可以包容有毒蛋白的表达。C41(DE3)来源于BL21(DE3)。该宿主菌含有一个基因突变,能够降低T7 RNAP的酶活力,所以能够阻止过表达重组表达有毒蛋白的细胞死亡。正如标准的BL21(DE3)菌株,过表达菌株C41(DE3), C41(DE3)pLysS, C43(DE3), 和C43(DE3)pLysS是λDE3的溶源性菌株。这些菌株在lacUV5启动子的下游含有一个T7 RNA聚合酶基因。这些宿主菌适合于表达克隆于T7启动子表达载体上的基因。过表达菌株C41(DE3), C41(DE3)pLysS, C43(DE3), 和C43(DE3)pLysS在lon和ompT蛋白酶的缺陷上是不同的。请注意的是,该过表达系列宿主菌的蛋白表达量与BL21(DE3)相比要稍低。