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[乳腺癌，139点]HBreD139Su01
[VIP第1年] 指数:1
EPB49-和元
NEU2-和元
RBM10-和元| 提供商： | 和元上海 |
| 服务名称： | 慢病毒包装 |
| 规格： | IU/ml |
慢病毒包装
慢病毒包装简介：
慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。它是一种改自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，同时也是一种RNA病毒，可以利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定长时表达。
慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV（Human immunodeficiency virus）、EIAV（Equine infectious anemia virus）、 FIV（Feline immunodeficiency virus）、 SIV（Simian immunodeficiency virus）。其中研究最多最为透彻的是 HIV。
慢病毒包装主要用于难转染的细胞，稳定株的制备，神经系统的定位注射实验等。
慢病毒包装实验流程：
1.根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等）获取目的基因；
2.根据客户要求选择对应载体；
3.将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；
4.测序鉴定重组质粒，高纯化（不含内毒素）提取的重组质粒；
5.使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染 293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液；
6.通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
7.使用病毒液感染 293T 细胞，药物筛选细胞，构建稳定表达细胞系。
慢病毒包装的生产流程图
慢病毒载体构建指南
| 载体类型 | 说明 | 服务方式 | 应用途径 |
| pLOV | 使用II型启动子的载体，用来表达mRNA、LncRNA和mir30L类似结构 | 载体构建及病毒包装 | 基因表达 |
| 特异性启动子载体构建 | 组织特异性表达 | ||
| mir30结构的载体构建及病毒包装 | miRNA、shRNA表达 | ||
| pLKD | III型启动子（H1,U6） 载体，主要用以表达shRNA和miRNA | 定制靶点 | 基因干扰 |
| 成套靶点（三个）及病毒包装 | 提供一个有效干扰 | ||
| miRNA表达载体构建及病毒包装 | 高表达miRNA | ||
| miRNA抑制载体构建及病毒包装 | 封闭miRNA表达 |
启动子性质与应用
| 启动子名称 | 性质和作用 | 应用细胞 |
| CMV | 人巨细胞病毒启动子，表达强 | 肿瘤细胞、原代细胞 |
| CAG | CMV与鸡beta-actin的嵌合启动子，表达较强 | 干细胞、原代细胞 |
| UbC | 泛素C启动子表达广泛 | 干细胞、原代细胞、立体神经元 |
| EF1a | 延长因子启动子 | 干细胞、血液来源细胞 |
标记基因性质与应用
| 筛选标记 | 性质 | 筛选方式 |
| PuroR | 嘌呤霉素抗性基因 | 嘌呤霉素1~10ug/ml，2-3d |
| NeoR | 新霉素抗性基因 | G418 100~1000ug/ml，2-3d |
| GFP | 绿色荧光蛋白，激发波长488nm，发射波长507nm | 流式分选 |
| RFP | 红色荧光蛋白，激发波长563nm，发射波长582nm | 流式分选 |
| mCherry | 红色荧光蛋白，激发波长587nm，发射波长610nm | 流式分选 |
表达载体设计要点
| 设计方式 | 载体设计 | 优点 | 缺点 |
| 独立表达 | 目的基因单独或与标签组成表达框 | 保证结构独立性 | 难于观察和确定感染效率 |
| 融合表达 | 与标记基因直接相连表达融合蛋白 | 可反映蛋白分布 | 影响蛋白结构独立性 |
| 非融合表达 | 通过2A序列分隔目的基因和标记基因 | 结构独立，确认感染效率 | 无法反映蛋白分布 |
病毒相关技术服务：
病毒包装服务 腺相关病毒包装 慢病毒包装 腺病毒包装 逆转录病毒包装
