货号: | GF084 |
生长状态: | 良好 |
年限: | 详询 |
运输方式: | 常温寄送 |
器官来源: | 组织 |
组织来源: | 组织 |
数量: | 1 |
规格: | 1*10^6/25c㎡ |
规格:80%密度、25cm2培养瓶、细胞一瓶
特点:细胞代数为4代
包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;说明书
细胞来源:ATCC
货期:1周
运输方式:联邦空运
售后:收到细胞后7天,如发现细胞有质量问题(如污染,死亡,快递运输等原因)时,应及时拍照反馈给我们,到货一周内细胞有问题免费补寄一株;一个月内半价购买一株。
使用说明书
本产品仅供科研使用,不得用于临床及诊断使用!
一、客户自备试剂及培养条件
1、PBS
2、培养条件:DMEM(高糖),10%胎牛血清
3、0.25% (W/V)胰蛋白酶(含0.02% EDTA)。
4、气相:空气95%,CO2 5%,温度:37℃。
二、细胞背景
1、生长方式:半悬浮 2、种属:人
四、培养方法
收到细胞后,先在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况,并放培养箱里静置3-4个小时后再观察依情况处理。因细胞株运输途中受多种不可控因素(如强烈振动、温度变化、时间长影响,达不到理想生长条件,极易造成细胞漂浮并不能恢复贴壁能力、死亡等状况)
二:如果细胞已长满(达80-90%)。即可进行传代,具体步骤如下:
传代,具体步骤如下:
贴壁细胞的处理方式:
1.弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2.向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的新鲜培养液,轻轻吹打细胞。
3.加入等量的新鲜培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。
4.传代比例:1:2-1:3
悬浮细胞的处理方式:
1:不用胰酶消化。
2.用吸管吸培养基,轻轻吹一吹,把细胞悬液收集到离心管。
3.1000转离心5分钟,去掉上清液,再换新培养基,重悬。
4.传代比例:1:2-1:3
五、常见问题及解决方案
1、培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
注意:观察细胞最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。