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多抗套餐1（从蛋白抗原到抗血清）
免疫沉淀
免疫荧光
[VIP第1年] 指数:2
通过青浦区市场监督管理局认证 
MTT细胞增殖及细胞毒
转移摇床（新款、调速
明胶(Gelatin)
WB套装（威奥试剂订单
小鼠VEGFR2(KDR)
改进型柠檬酸钠抗原修| 提供商： | 威奥 |
| 服务名称： | 免疫印迹(Western-blot) |
| 规格： | 可以参观学习实验 |
| 技术服务价目表 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 免疫印迹(Western-blot)技术服务 |
| 原理： 免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。 ² 免疫印迹实验流程： ◎ 细胞及组织蛋白质抽提； ◎ 蛋白质定量； ◎ 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)； ◎ 蛋白质转膜； ◎ 膜的封闭； ◎ 一抗、二抗孵育； ◎ 结果检测：化学发光法检测，X 胶片曝光显影； ◎ 数据分析； ² 实验要求： 1. 客户需自备一抗，本公司可代为购买一抗。 2. 标本尽可能新鲜；标本量：组织块大于100mg；细胞数大于1×106。 3. 技术部将在收到标本后20-30个工作日之内提交实验结果，实验结果以数据和图片的 形式提交给客户。、 标本收集及注意事项： u 对于组织样品： 采集新鲜组织，离体时间尽量不超过15分钟，用锡箔纸包埋或者放入冻存管中，先放入液氮中速冻几个小时或者过夜，再放入-80度冰箱或液氮保存。 n 细胞样品： 1、贴壁细胞：取大约1*107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入适量的PBS悬浮细胞，转入离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入液氮中速冻，然后转入-80度冰箱保存。 2、悬浮细胞：离心收集细胞，弃去培养液，加入适量PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入液氮中速冻，然后转入-80度冰箱保存。 Western疑难问题解答 无显色信号问题原因分析： 1.裂解产物中抗原含量不足 a.抗原无表达或表达含量过少 b.蛋白讲解或上样量不足 c.裂解产物制备失误 2.制胶浓度比例不合适 3.转膜不完全 4.一抗稀释浓度过大 5.二抗与一抗稀释浓度不匹配 6.显色系统灵敏度不足 非特异性杂带出现原因分析： 1.封闭或清洗不彻底 2.一抗浓度过高 3.蛋白讲解 4.抗体与非特异性抗体交叉反应 5.蛋白间聚集作用，形成二聚体 6.转移膜使用不当 7.操作过程中转移膜干燥 |
