点击图片查看原图
B-PER 6xHis融合蛋白纯化试剂盒
Anti-Myc Affinity Gel
Standard Plain Polystyrene Microsph
[VIP第1年] 指数:2
通过通州分局认证 
Gelatin Sepharose 4F
Total RNA Kit I (50)
Exo-Resistant Random
蓝盖玻璃瓶 （蓝盖试
鸟嘌呤 cas:73-40-5 | 货号： | R0050 |
| 保存条件： | 4度 |
| CAS号： | R0050 |
| 供应商： | 索莱宝 |
| 数量： | 大量 |
| 英文名： | 核蛋白抽提试剂盒 |
| 保质期： | 1年以上 |
货号 ：R0050
规格：50T/100T
产品内容：
| 试剂盒组成 | 50T | 100T |
| 浆蛋白抽提试剂 | 25ml | 50ml |
| 核蛋白抽提试剂 | 5ml | 10ml |
| PMSF | 300ul | 1ml |
保存：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。
产品简介：
本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela细胞，40mg）。
操作方法 ：
对于体外培养细胞：
1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免过度消化蛋白）。500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．按照每20ul细胞沉淀加入200ul浆蛋白抽提试剂的比例加入裂解液（2×106
个细胞约20ul或40mg）。
5．最高速剧烈涡旋15秒，使细胞完全分散开。若沉淀没有完全分散，可以适当延长涡旋时间。
6．500 g离心2～3分钟，去上清。
7．加入浆蛋白抽提试剂200ul，最高速剧烈涡旋5秒，冰浴10分钟。
8．最高速剧烈涡旋5秒，4℃ 12000～16000g离心10分钟。
9．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可进行后续的PAGE、Western，但蛋白浓度很低，可能需要浓缩。
10．完全吸尽残余的上清，避免细胞浆蛋白污染，加入100ul核蛋白抽提试剂。
11．最高速涡旋15秒或用移液器吹打至完全分散,放回冰浴中5分钟，4℃12000～16000g离心10分钟。
12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。
对于组织样品：
把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg组织加入200ul-500ul PBS，用匀浆器冰上匀浆匀浆制成细胞悬液，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200ul浆蛋白抽提试剂后接上述步骤
注意事项 ：
1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号PC0020)测定蛋白浓度。
2．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
相关产品 ：
P1020 1×PBS，PH7.27.4，0.01M
P1010 4×蛋白上样缓冲液（含β巯基乙醇）
S1010 10% SDS
PR1400 低分子量蛋白MARKER
PC002 BCA法蛋白浓度测定试剂盒
PC0030 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
温馨提示：不可用于临床治疗。
