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小鼠原代心肌细胞

产品价格: ¥4640.00

最小起订量:暂无 可售数量:999盒

发货时限:
暂无
所在地区:
中国上海
有效期至:
长期有效
最后更新:
2021-05-19 01:30:07
浏览次数:
23

产品详情

品牌名称:
iMedCell
货号: ME-2002005
iMedcell ® 小鼠原代心肌细胞
 
规格:1×106cells/
活细胞运输:收到细胞后,请立即放入培养箱中培养;
冻存细胞运输:可暂存于-80℃冰箱或液氮长期储存。
小鼠原代心肌细胞产品简介:
     小鼠原代心肌细胞产品是一种高纯度、高活性的细胞产品。该产品分离自小鼠胚胎心脏组织,采用埃德斯生物的小鼠心肌细胞分离试剂盒进行分离、培养,可表达心肌细胞蛋白标记物和保持细胞收缩性。同时采用二级消化法、梯度离心加梯度贴壁法可特异性除去非心肌细胞,获得高纯度、高活性的小鼠原代心肌细胞。这些细胞具备典型的心肌细胞电生理特性,自律性、兴奋性、传导性和收缩性。
 
小鼠原代心肌细胞包含材料:
产品货号 名称 规格 数量
ME-2001003 小鼠原代心肌细胞 1×106 1瓶(支)
ME-1001016 小鼠心肌细胞分离试剂盒 100 ml 1
 
小鼠原代心肌细胞培养材料准备
  1. 使用75%酒精擦拭试验台;
  2. 准备酒精灯、酒精棉及用于盛放实验处理后小鼠的垃圾袋;
  3. 剪刀、镊子、微型镊子等解剖用具需提前进行灭菌处理;
  4. 吸取适量HBSS-HEPES至培养皿中并放置于冰上(细胞房内操作)。
  5. Wash buffer一直放于冰上保持低温。
 
小鼠原代心肌细胞操作方法
  1. 取心脏
  1. 左手捏住小鼠背部皮肤,使用酒精棉(95%酒精)擦拭小鼠胸腹,用解剖剪在小鼠剑突处正中线偏左向上剪开,略压胸骨,使心脏自然跳出,用弯镊子勾住心脏根部,取出心脏,置于盛有遇冷Wash buffer的培养皿中。
  2. 在解剖镜下使用微型镊子和解剖剪剪去心房。
  1. 组织清洗和预消化:
  1. 经酒精擦拭后,将培养皿移入细胞房超净工作台,用遇冷的Wash buffer清洗3次,去除血污后,将心脏剪成约1mm3的组织块,再清洗2次,
  1. 将组织块移入培养瓶中,加入适量Cell Dissociation Solution后放入4冰箱消化过夜。
    • 24h
第二天:
  1. 实验准备:
  2. 37,将Mouse Cardiomyocytes Culture Medium放入水浴中加热。
  3. 终止消化:
  1. 把培养瓶从4冰箱取出并将其中的心脏和消化液移入一个新的50ml离心管中,加入等量经预热的Mouse Cardiomyocytes Culture Medium。离心管在37水浴锅中摇动消化3min后弃上清;
  1. 消化:
A. 在50ml离心管中加入5ml Cell Dissociation SolutionⅡ,37水浴中摇动消化1min后将上清液加入遇冷的10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium中,混合均匀并置于冰上保持低温。
  •  
B.加入5ml Cell Dissociation Solution37水浴中摇动消化1min后弃上清。
C. 重复3.A的步骤直至组织完全消化。
注意:吸取上清时尽量避免吸出沉淀。
D.将收集的上清在常温下1260rpm,离心5min。轻轻吸除上清,用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。
  1. 差速贴壁:
  1. 将重悬的细胞经过100μm滤膜过滤后铺入已经预先经过明胶包埋的培养皿中,放入细胞培养箱37℃,5%CO2中孵育75min
  2. 取上清移至新的经明胶包埋的培养皿中,重新放入细胞培养箱中孵育75min
注意:可倾斜培养皿,取培养基沿壁轻轻冲洗。
  1. 细胞铺板:
  1. Mouse Cardiomyocytes Culture Medium预先在37水浴中加热。
  2. 取出培养皿,将上清移入15ml离心管中,530rpm,离心5min,轻轻吸除上清,用已经预先加热至371ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重悬细胞。
  3. 利用血细胞计数板进行细胞计数,用台盼蓝检测细胞存活率。
  4. 根据所计的细胞数使用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium进行稀释调整细胞浓度,将细胞移至预先使用明胶包埋过的48孔板或3.5cm培养皿中。
  5. 将培养皿放入细胞培养箱中培养24h后观察细胞状态,若细胞状态佳且浓度合适,则可进行后续实验。

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