货号: | CA1410 |
保存条件: | 2-8度 |
CAS号: | --- |
供应商: | Solarbio |
数量: | 大量 |
英文名: | Reactive oxygen species assay kit |
保质期: | 一年 |
规格: | 500t |
CA1410 活性氧检测试剂盒 100T
货号:SC1300
规格:100-500T
产品内容:
10 mM DCFH-DA in DMSO 0.1 ml −20 ºC 保存
活性氧供体 1 ml −20 ºC 保存
本产品由北京索莱宝科技有限公司优惠供应,公司常年现货,欢迎广大科研工作者及经销商同仁前来咨询选购;另外公司专业从事进口科研生化试剂的批发及零售业务,产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学等诸多生命科研领域。因公司业务发展的需要,现诚征各地经销代理商,欢迎有志从事本行业的精英、同行莅临指导。
产品简介:
活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、 过氧化氢、 及其下游产物过氧化物和羟化物(O2• − ,
H2O2, •OH, ONOO − , •NO)等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。采用
2,7-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA)是迄今最常用、 最灵敏的细胞内活性氧检探针。 DCFH-DA没有荧光,
进入细胞后被酯酶水解为dichlorofluorescin (DCFH)。 在活性氧存在时DCFH被氧化为不能透过细胞膜的强绿色
荧光物质dichlorofluorescein (DCF),其荧光在激发波长 502 nm,发射波长 530 nm附近有最大波峰,强度与细
胞内活性氧水平成正比。此活性氧检测系统本底低,灵敏度高,重复性好,操作简便。
本试剂盒适于荧光显微镜、 激光共聚焦显微镜等图像检测, 和微板荧光分析仪(multiwell fluorescence plate
reader)、流式细胞仪定量 ROS 检测。
工作波长:
最佳激发波长 500、485 (500 ± 15 nm),最佳发射波长 525 (530 ± 20 nm)。也可按照 FITC 荧光检测条件
检测。
操作步骤:
一、试剂准备:
1. DCFH-DA 可稀释于培养基或缓冲液中。 血清或培养基颜色并不影响 DCFH-DA 及细胞内荧光产生, 但
可能会影响荧光显微镜观察,干扰荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪荧光测定。可将 DCFH-DA 稀
释于无酚红培养基或适宜的缓冲液如 PBS 中。这依赖于使用何种荧光设备进行测定。
2. 加入 DCFH-DA 的时机或孵育时间,以最终能顺利检测细胞内活性氧为目的。药物处理时间较短(<2
小时)或预计 ROS 效应较弱,可先加或同时加入 DCFH-DA。反之,treat 刺激时间较长(>6 小时)或预计产生
ROS 效应较强,可后加 DCFH-DA。
3. 活性氧供体含高纯度 12 mM H2O2。加入细胞后其本身即是一种活性氧,而且在代谢过程中可产生其
它类型的活性氧,均可使 DCFH-DA 氧化为 DCF 呈现强绿色荧光。因而,用户可使用该试剂作为测试实验系
统或仪器的阳性试剂,以初步观察细胞活性氧所产生的荧光的一般特征,并且也可以将该实际作为实验的一
个阳性对照。推荐该试剂的细胞工作浓度为 20~100 µM 或更低浓度,但超过 200µM 将产生细胞毒。如果用
户熟悉 ROS 荧光或实验没有必要采用阳性对照,可以不加该试剂。
二、加入荧光探针:
1. 加入 DCFH-DA 于培养基,推荐初始工作浓度为 10 µM。对不同的细胞和处理,DCFH-DA 工作浓度
可为 100 nM~20 µM,需进行预实验确定合适的浓度。总体稀释倍数应在 1:500~1000 以上以避免 DMSO 对细
胞的影响。以 DMSO 作为溶剂对照。
2. 37 ºC 孵育细胞 30min~至几个小时,通常 30-60min 即可。孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、
DCFH-DA 浓度有关。
3. PBS 洗涤细胞 2 次。
三、荧光检测
采用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜图像检测照相,绿色荧光强度代表活性氧水平。也可进行微板荧光
分析仪(multiwell fluorescence plate reader)实时或每 10 分钟分时逐点检测荧光强弱。对于流式细胞仪可将细胞
用胰酶消化 PBS 洗涤后重悬检测。
2004年至今,公司已持续为暨南大学、南开大学、东北林业大学森林植物生态学重点实验室、香港科技大学、北京大学化学院、辽宁省药
物研究所、华中农大、中科院理化所、吉林药学院、武汉理工、第三军医大学、第四军医大学、军事医学院、印度昌迪加尔大学及北美、
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