货号: | RNCL-002 |
数量: | 100万 |
规格: | 1ml/T25 |
大鼠胶质瘤细胞(C6)
货号:RNCL-002
细胞介绍
胶质细胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea诱导的大鼠胶质瘤克隆,并经过一系列的体外培养和动物传代交替后建成的。当细胞从低密度生长到满瓶时,S-100产量增加10倍。
细胞特性
- 来源:大鼠,胶质瘤
- 形态:成纤维细胞,贴壁生长
- 含量:>1x106 个/mL
- 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
- 规格:T75瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存:使用T25瓶充液发送活细胞。收到细胞后,请先在显微镜下检查细胞生长状态,并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后,再次检查细胞状态。若状态良好,可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物,请及时与我们取得联系。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
- 准备F12K培养基(F12K,SIGMA,货号N3520,添加NaHCO3 2.5g/L),82.5%;马血清,15%;优质胎牛血清,2.5%。
- 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
- 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
- 细胞处理:
- 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
- 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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