货号: | ZC-K108 |
供应商: | 茁彩生物 |
数量: | 1000 |
英文名: | pStable -TA Cloning Kit |
保质期: | 12个月 |
保存条件: | -20℃保存 |
规格: | 20 rxns |
保存条件: -20℃ 12个月。
产品说明:
本载体外源片段插入位置位于自杀基因的编码区,当片段与载体成功连接是,自杀基因无法正确表达,包含重组子的细胞得以正常生长;当片段与载体连接不成功时,自杀基因正确表达,包含重组子的细胞无法正常生长。理论上,在抗性筛选条件下生长的菌落均为含有插入片段的阳性重组子。本载体适用于 3’端含有单个 A 碱基突出的 DNA 片段的克隆。
特 点:
- 快速:普通 T4 连接酶 10-20 分钟。
- 高效:无需蓝白筛选,阳性率接近 100%。
- 适用于短片段和长片段(10 bp-7 Kb)克隆。
- 提供卡那霉素和氨苄青霉素两种筛选。
- 可用于体外转录:T3 promoter 和 T7 promoter。
- 通用测序引物:M13 Forward Primer 和 M13 Reverse Primer。
1、最佳插入片段DNA量载体与片段摩尔比=1:7
*可以粗略的按照“1 Kb 20 ng”的比例计算。(如1 Kb加20 ng、1.5 Kb加30 ng等)
2、最佳载体使用量:1 μl
3、最佳反应体系
3-5 μl,体积不足时可以补充无菌水。
4、最佳反应时间
*片段为胶回收产物,反应时间取最大值。
5、最佳反应温度:25℃
*若片段是高GC结构,可以37℃反应。
(推荐用PCR 仪控温)
① 片段大小为0.1-1 Kb(含1 Kb):5-10 min
② 片段大小为 1-2 Kb(含2 Kb): 10-15 min
③ 片段大小为 2-3 Kb(含3 Kb): 15-20 min