货号: | JC-0102112 |
生长状态: | 良好 |
运输方式: | T25培养瓶/冻存管 |
器官来源: | 肾 |
是否是肿瘤细胞: | 否 |
细胞形态: | 上皮细胞 |
物种来源: | 人 |
组织来源: | 胚肾 |
细胞类型: | 贴壁细胞 |
供应商: | 尽其用 |
数量: | 1000000 |
规格: | 1000000 |
293A来源于人胚肾,采用293A 细胞培养基(HEK2A-90011)进行培养,含有SV40启动子,特别适合于腺病毒的包装。
培养条件:
DMEM +10% FBS;37℃,5% CO2
293A细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。
在1000 RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。
然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。
第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
传代可参考以下方法:
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
1. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,
然后在显微镜下观察细胞消化情况,若293A细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
2. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
3. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
注意事项:
1.收到293A细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3.静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4.贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,
留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5.寄送的细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。
刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,
以免因不适应而造成生长状态不佳。
6.细胞胰酶消化液建议使用PBS配制。
7.因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞售后问题我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。
293A细胞运输和保存:
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。