人胎盘羊膜间充质干细胞

货号：	S-05-004
生长状态：	优
年限：	2年
运输方式：	干冰
器官来源：	胎盘
是否是肿瘤细胞：	否
细胞形态：	长梭型
免疫类型：	无
物种来源：	人
相关疾病：	无
组织来源：	人胎儿胎盘羊膜
品系：	无
ATCC Number：	无
细胞类型：	干细胞
肿瘤类型：	无
供应商：	SALIAI
数量：	1.0
规格：	1×10^6

1. 产品基本信息
产品名称：人胎盘羊膜间充质干细胞
产品编号：S-05-004
规格：(1-1.5)×10^6 个细胞/管
冻存代次: P4
保存条件: 液氮
警告：产品冻存液中含有DMSO，具有潜在的生物公害，操作者请谨慎处理。

2. 产品介绍
人胎盘羊膜间充质干细胞来自人胎儿胎盘羊膜，是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，具有来源广泛、可塑性强、对供者无不利影响，无异体免疫排斥反应、避免伦理争议等诸多优点，因此成为组织工程、细胞治疗等基础研究或应用领域的理想种子细胞，具有广阔的临床应用前景，可用于治疗内分泌系统、神经系统、循环系统、免疫系统、血液系统等疾病，同时可作为细胞模型被广泛应用于体内外的细胞增殖、移植、分化和免疫调控研究。

3. 质量控制
(1) 本产品经过了病毒，细菌，真菌，支原体。
(2) 本产品经过细胞复苏活率，流式鉴定，细胞周期，生长曲线，倍增时间，克隆形成率，分化潜能检测。

4. 产品特性
(1) 本产品复苏细胞活率达至80%以上。
(2) 操作规范的条件下，本产品具有良好的传代能力，至少传至10代。
(3) 本产品具有较强的分化潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
(4) 流式检测鉴定（CD73+，CD90+，CD105+）≥95%，（HLA-DR+、CD45+、CD34+）≦2%。(5) 该产品仅用于科研，不可应用于临床治疗或其他方面。

5. 处理原则
(1) 在无菌的条件下处理该产品。
(2) 人胎盘羊膜间充质干细胞复苏培养后，建议冻存一部分细胞作为备份。
(3) 建议用于科研的细胞代次不超过10代。
(4) 建议细胞接种密度是(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2,具体数量根据细胞生长状态加以调整。

6. 人胎盘羊膜间充质干细胞的复苏
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他选择培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS +(1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline（1×PBS）
(2) 复苏步骤 从低温容器中取出冻存管，迅速置于37°C水浴中连续晃动，1min内快速解冻； 在无菌条件下，将完全解冻的细胞悬液转移至含有10-15ml细胞培养基的离心管中； 1500 rpm 离心5 min，吸弃离心后上清； 加入适量的新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数及活率检测； 根据细胞数量及活率，用完全培养基调整细胞接种密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布； 在培养器皿上做好标记，转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 观察细胞状态，隔天换液；当细胞汇合度达到80-90%时，可进行传代处理。 图1 已贴壁的人胎盘羊膜间充质干细胞(40× )

7. 人胎盘羊膜间充质干细胞的传代
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他可用培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-Buffered Saline（1×PBS） 0.25%胰蛋白酶溶液
(2) 传代步骤 提前将完全培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次，注意操作轻柔，不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量)，室温静置消化2-3min，显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时，加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液，反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔，尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中，1500rpm离心5min。 吸弃上清，加入适量完全培养基重悬细胞沉淀，计数。 调整细胞密度为(1.0-1.3)×104个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布。 在培养器皿上做好标记，转移至5%CO2、37℃、饱和湿度为95%的CO2培养箱中培养。 显微镜下观察细胞状态，当汇合度达到80-90%时，可进行下一次传代处理。

8. 人胎盘羊膜间充质干细胞的冻存
(1) 所需材料 人胎盘羊膜间充质干细胞完全培养基其他可用培养基，配比如下：100ml DMEM/F12培养基 + (10~15) ml FBS + (1~2ml) 非必须氨基酸 + (1~2ml) L-谷氨酰胺 Phosphate-BufferedSaline（1×PBS） 0.25%胰蛋白酶溶液 间充质干细胞冻存液其他可用冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO
(2) 冻存步骤 提前将培养基、PBS、胰蛋白酶溶液放置室温。 在无菌条件下，小心吸弃培养器皿中的培养基。 用1×PBS清洗细胞2次，注意操作轻柔，不要损害贴壁细胞。 加入0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞(根据所用培养器皿确定加入量)，室温静置消化2-3min，显微镜下观察消化情况。 当观察至80%以上细胞变圆时，加入完全培养基终止消化。 用移液管吸取溶液，反复吹打培养器皿皿底。吹打时动作轻柔，尽量避免产生气泡。 将细胞悬液转移至离心管中，1500rpm离心5min，同时取样进行细胞计数。 弃离心后上清，根据细胞计数结果，使用细胞冻存液重悬细胞，调整细胞密度为105-106个/ml，轻轻吹打混匀后分装至冻存管中，旋紧冻存管盖。 冻存管做好标记，进行程序降温冻存，可选择冻存盒或程序降温仪其中一种方式冻存。1) 冻存盒冻存方法：冻存盒直接放于-80℃，第二天将细胞转移至液氮中长期冻存；2) 程序降温仪冻存方法：按照间充质干细胞预设程序程序降温，降温至-80℃以下后直接将细胞转移至液氮中长期冻存。