货号: | LPZ2014R |
供应商: | 上海研谨生物科技 |
数量: | 大量供应 |
英文名: | 上海研谨生物科技 |
规格: | 3X200ml/Kit |
产品编号:LPZ2014R
产品名称:兔肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒
产品规格:3X200ml/Kit
产品价格:¥1200.00元
本品用于分离兔肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞
“XXXX”动物肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞
分离液实验方法
技术文档编号:TBD0052SOP
【产品规格】
3×200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用,试剂内容如下:
名称 | 产品编号 | 规格 | |
A | 分离液 1 | 200ml | |
B | 分离液 2 | 200ml | |
C | 分离液 3 | 200ml | |
D | 试剂 F(赠品) | F2013TBD | 200ml |
E | 样本稀释液(赠品) | 2010C1119 | 200ml |
F | 清洗液(赠品) | 2010X1118 | 200ml |
G | 说明书 | 1 份 | |
【实验前准备】
适用仪器:最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
- 首先制备组织单细胞悬液,制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。取一支适当的离心管,依次小心加入分离液 1、分离液 2、分离液 3(体积比为 3:2:1,体积总量与组织单细胞悬液体积相等),制成梯度界面,各液面分层一定要清晰。(如组织单细胞悬液样本量为 6ml,则加入分离液 1:3ml、分离液 2:2ml、分离液 3:1ml。)
- 用吸管小心吸取组织悬液样本加于分离液液面上,400-500g,离心 20-30min(注:根据组织悬液样本量确定离心条件,样本量越多,离心力越大,离心时间越长,最大离心力可达 1200g,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果)。
- 离心后,此时离心管中将出现两层环状乳白色细胞层。
- 用吸管吸取两层环状目的细胞层(如有红细胞混杂则需用红细胞裂解液(需另购)裂解
红细胞,具体操作说明详见“红细胞裂解液使用说明”)到 15ml 离心管中,往所得离心
- 250g,离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液(产品编号:2010X1118)重悬所得细胞。
- 250g,离心 10min。
- 重复 6、7、8,弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
【注意事项】
- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果,最好在取样 2h 内进行实验,样品存放时间越长,细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
- 本实验最好不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。
- 如所实验后细胞得率或活性过低,请联系技术支持以寻求帮助。
【储存条件及有效期】
常温保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启
封后置常温保存。
【参考值(参考范围)】
本实验肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞提取率大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。
红细胞 | 白细胞 | 血小板 | |||
(4.0-10.0)×109 | |||||
含量(个/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | (1.0-3.0)×1011 |
50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
【相关实验技术方案】 |
- 组织单细胞悬液制备技术。
- 所获得肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞的培养技术。
- 所获得肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞的核酸提取技术。
- 所获得肿瘤组织淋巴细胞、单核巨噬、粒细胞的鉴定方法
A.流式细胞技术
B.免疫组化技术
C.原位杂交技术
D.PCR 技术
【可能存在的问题及解决方法】
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示:
出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 |
离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | |
离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 |
离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 | |
- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离心时间,对离心转速进行调整。
- 本分离液依照国际标准,全部使用药用级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可能出现红细胞沉降不完全的情况,可以适当加大离心转速。
注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以 50-100g 为基数,直至达到最佳分离效果,
离心力最小不得小于 400g,最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。