细胞名称: | C-33 A,人子宫颈癌细胞 |
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种属来源: | 人 |
组织来源: | 子宫 |
疾病特征: | 子宫颈癌 |
细胞形态: | 上皮细胞样 |
生长特性: | 贴壁生长 |
培养基: | MEM培养基(MEM,GIBCO,货号41500034),90%;FBS,10%。 |
生长条件: | 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃, |
传代方法: | 1:2至1:6,每周2次。 |
冻存条件: | 90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存 |
支原体检测: | 阴性 |
C-33 A人子宫颈癌细胞特点和简介
C-33 A 细胞株是N. Auersperg从宫颈癌切片中建立的一系列细胞株中的一株,源于宫颈癌活检标本。 细胞一开始就表现出亚二倍体核型及上皮细胞形态。 连续传代可以观察到核型不稳定。 存在成视网膜细胞瘤蛋白(pRB),但大小不正常。P53表达上调,且有一个273位密码子的点突变导致Arg -> Cys的替换。人乳头瘤病毒DNA及RNA阴性。C-33 A细胞复苏细胞注意事项: 1)收到细胞后当天换液,全部更换成客户自己的新鲜培养基,放进培养箱,第二天再消化。
2)边观察边消化,根据细胞的形态,终止消化时间,采取以半分钟间隔吹打细胞边缘,如可吹打下来,即终止消化。客户摸索比较好的消化时间。
3)随细胞有一份细胞操作说明书,请客户仔细查看。
4)记得加1%双抗,降低被污染的概率。另外尽早冻存留种,以备后用。
5)售后时间为一周,QC检测合格后发货保证细胞状态良好,收到细胞7天内出现状态不佳等情况请及时反馈,会有技术同步指导操作协助解决,如仍未养活免费重发。
6)收到细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请您务必重视。
7)刚收到细胞时,胎牛血清可以用15%培养两三天,利于细胞尽快恢复状态,细胞状态稳定后,再调回10%即可。
(其中1,2条针对于贴壁细胞,悬浮细胞详情请见细胞操作说明书)
C-33 A细胞传代操作步骤:
(一)贴壁细胞传代
1)提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2)吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。
3)加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用。
4)用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。
5)将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
(二)悬浮细胞传代
1)将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。
2)弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。
3)将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
细胞常见问题及解决方案:
1)培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2)细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以离心去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。3)对于生长缓慢的贴壁细胞:可采用适当的提高培养基中血清浓度,或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
4)对于生长不均的贴壁细胞:在培养过程中若出现细胞分布明显不均时(即某一区域细胞已重叠生长,而旁边则为一块空白),此时可将细胞进行消化,重新打散,贴壁,加入新培养基进行培养。
一毫升小管操作方法 小管内也是此细胞:
1. 用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)。
2. 严格无菌操作,用吸管吸出管中细胞至9ml完全培养基混匀。
3. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。
4.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO7 培养。
C-33 A细胞培养的环境:
1.无污染环境:化学污染,微生物污染。
2.温度环境:37℃。偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强。
3.气体环境:95%空气加5%二氧化碳。
4.酸性环境:大多数细胞的适于PH为7.2-7.4,细胞耐酸性比较耐碱性大一些。
5.细胞培养基:合成培养基,天然培养基。