真菌基因组DNA提取试剂盒

货号：	D2300
CAS号：	见说明
供应商：	索莱宝
数量：	现货
英文名：	见说明
保质期：	三年
保存条件：	低温保存
规格：	50T

真菌基因组 DNA 提取试剂盒说明书
货号：D2300
规格：50T/ 100T
保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：                      50T               100T
                      RNase A    1ml               1ml×2
                      蛋白酶 K    1ml               1ml×2
                      玻璃珠      6g                 11g
                      溶液 A      10ml               20ml
                      溶液 B      10ml               20ml
                      漂洗液      15ml               15ml×2   
                      洗脱液      10ml                20ml
                      吸附柱      50 个               100 个
                      收集管      50 个               100 个 
                      说明书      1 份                 1 份
产品简介：
 真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多，已报道的属达 1 万以上，种超过 10 万个。真菌通常又
分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可
直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA，可以
直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。
操作步骤：
 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机
在室温下离心。
1、样品的处理：
 1）对于酵母菌，取 1-2ml 培养好的菌液，离心收集，弃上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再
加入 100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 5-10min。
 2）霉菌(孢子也可相同处理)：取 50-100mg 菌丝，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加
入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 30min。
 3）大型真菌（如蘑菇等）：称取 50-100mg 样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复 3 次，使样品研成粉末
（如无液氮，可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器适当研磨），加 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg
玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约 5min。
2、加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K，充分混匀，55℃水浴消化，30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次，12000rpm
离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀，可再次离心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混匀。如出现白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即会消失，不影响后
续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致上柱后堵
柱子，请增加消化时间。
4、再加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，将溶液和絮状沉淀都
加入吸附柱中，放置 2 分钟。
5、12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸
附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否
则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置
5min，12000rpm 离心 1min。
10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。
注意事项：
1. 由于真菌种类万千，对于一些特别难处理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振荡，蛋白酶K处理，一般都
可以得到一定量的基因组DNA，如电泳检测很弱，一般PCR都会有较好结果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少，可加长玻璃珠处理时间，如果提取DNA成弥散短条带，可减少玻璃珠处理时间。
4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要
用水做洗脱液应保证其pH值在 8.0 左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于 7.0 会降低洗脱效率；
DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5. DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回
收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，
OD260值为 1 相当于大约 50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使
用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
6. 在确保样品无误的情况下，如经过多次试验，都无法提出DNA，请将部分样品寄至我公司，我们代为摸索优
化条件，以使您的实验能够正常进行下去。
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