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蛋白双向2D-WB 电泳实验服务
蛋白质组学
(原核)可溶蛋白表达实验服务
通过海淀分局认证 
| 提供商： | Genenode |
| 服务名称： | 原核蛋白表达与纯化服务 |
根据客户需求，提供从基因克隆，载体构建，到蛋白表达及纯化一站式蛋白表达服务。
服务特色：
1、一站式解决方案，从基因合成，载体构建，蛋白表达及纯化一站式服务。
2、专业的技术团队，具有多年的蛋白表达及纯化服务经验，经验丰富。
3、完备表达载体库，多种促溶促表达标签的优化组合，确保成功高效表达。
| 服务步骤 | 实验内容 | 交付结果 |
| 步骤1： 目的基因全基因合成 | 1.从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。 2.根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。 3.合成设计好的基因序列，并克隆到标准T载体。 | 1.含目的基因的冻干质粒，穿刺菌及测序报告（如果客户直接提供构建好的质粒，则免去这部分费用）。 |
| 步骤2： 目的基因亚克隆 | 1.培养并抽提含有目的基因的载体质粒。 2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。 3.测序验证表达质粒的准确性。 | 正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。 |
| 步骤3： E. coli 表达菌株转化及筛选 | 1.培养并抽提构建好的表达质粒。 2.将表达质粒转化至高效的E. coli表达菌株中。 3.至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。 4.SDS-PAGE电泳检测培养后的目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。 | 重组质粒的表达菌株及表达检测报告。 |
| 步骤4： 目的蛋白表达及纯化 | 1.摇瓶培养1L重组细菌，对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。 2.通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。 3.利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目的蛋白。 4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。 5.通过Western-blot验证目的蛋白正确性。 | 1.纯化好的目标蛋白1-5mg及纯化报告。 2.可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度最高可达95%以上。 3.提供QC报告：SDS-PAGE，Western Blot。 |
| 步骤5： 目的蛋白的再加工及详细检测 | 1.对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。 2.内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。 3.通过HPLC，质谱等方法详细检测目的蛋白的质量 | 加工后的终产品及相关实验和检测报告。 |
1.根据客户需要，客户提供基因序列，我们提供基因合成，载体构建，蛋白表达及纯化一站式服务，最终按步骤收取实验费用。
2.蛋白在表达之前需要对核酸序列进行前期分析，但细胞膜蛋白和一些特殊的毒性蛋白不在服务范围之内。
3.因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg，最多10mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的，需要再次纯化获得更多的蛋白，另收费为2000/mg。
4.每次Western blot检测最多7个样品，因为要加入阳性对照，阴性对照以及Marker。本步骤只包含一次免费检测，如果需要更多次检测则费用为1500元/次。我们可以免费为客户提供抗His-tag的一抗，如果客户需要使用其他一抗，则需要客户提供，或者我们公司代购，费用单独计算。
5.我们还可以承接酵母蛋白表达，哺乳动物蛋白表达和昆虫细胞蛋白表达等服务。
具体产品折扣价请邮件或电话咨询，想了解更多产品信息，也可登录公司官网：www.genenode.com
