提供商: | 武汉云克隆诊断试剂研究所 |
服务名称: | 大鼠脊髓损伤模型 |
规格: | 询价 |
大鼠脊髓损伤模型
脊髓损伤(spinal cord injury ,SCI)是交通、工矿事故及运动意外中常见的中枢神经系统损伤性疾病,损伤所致的截瘫严重影响伤者的身心健康。脊髓损伤后可以触发一系列继发性病理生理级联反应,从而进一步加重脊髓组织损伤的程度。目前脊髓损伤模型繁多,但尚无统一的分型。
1.实验动物
SPF级Wistar大鼠,健康,雄性,体重为180g~200g
2.实验分组
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。
3.实验周期
4W
4.建模方法
1.取正常大鼠用水合氯醛作腹腔麻醉(350mg/kg),将大鼠俯卧,固定于大鼠固定板上,在背部脊髓两侧触摸大鼠最下肋与软组织分界处(浮肋与第 13胸椎连接处)作为骨性定位标志,向上、下 5 cm 范围备皮、脱毛后常规消毒,铺无菌手术单,在后正中线做纵行切口,大约 3cm ,依次切开皮肤、皮下筋膜,暴露椎旁肌,约平对第 10 胸椎棘突,钝性剥离肌肉暴露棘突、椎板和横突。参考定位:T9棘突倾向尾侧,T10 棘突中立位,T11 棘突倾向头侧。
2.确定 T10胸椎位置,用骨剪在 T9 与 T10、T10与T11 棘突及相应椎板之间分别做两个横行剪口,再在 T10 胸椎两侧,横突与椎板连接处做纵行剪口,形成一个方形剪口界线,然后用咬骨钳咬住 T10 胸椎棘突用力拉起即“揭盖”,去除 T10 椎板,形成方形骨窗,修整骨窗边缘,充分暴露 T10对应的脊髓。
3. 用Allen' s 撞击器制备脊髓损伤动物模型,打击时,用拉钩拉开脊髓两侧软组织,牵拉固定,使脊柱稳定,不受呼吸运动影响,使 20 g 重量的击打棍从 3 cm 高度自由落体,致伤能量 60 g·cm,撞击T10 骨窗对应的脊髓,造成急性脊髓损伤,击打脊髓后,击打棍不动,停留 3 min 再移开。
4. 撞击成功标准为:撞击脊髓组织水肿、出血,硬脊膜完整呈紫红色,紧张,膨隆,大鼠尾巴出现痉挛性摆动,双下肢躯体回缩样扑动,呈迟缓性瘫痪。常规分层缝合后回笼饲养。
5. 术后4W,水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后,将大鼠固定于固定板上,生理盐水、4%多聚甲醛常规灌固定,暴露脊髓 T8~ T12,迅速取出脊髓组织,4%多聚甲醛后固定 4 h,石蜡包埋切片(厚4um),HE染色,观察病理改变。
5.模型的评价
1. 术后一般情况观察 :各损伤组大鼠的术后基本情况基本一致,打击后大鼠均表现为身体痉挛性颤动,尾巴痉挛性摆动,双下肢及躯体回缩样扑动。麻醉苏醒后大鼠双下肢呈弛缓性瘫痪,可出现尿潴留或尿失禁。解剖可见伤后大鼠硬脊膜内充血或水肿。
2. 组织病理学变化
HE 染色可以观察到假手术组灰、白质组织结构基本完整,神经细胞在灰质中分布均匀、胞体饱满、形态正常、细胞膜完整,白质内神经纤维排列整齐, 细胞间质均匀。SCI 组可见灰、白质组织结构不完整,损伤区灰质可见大片出血、大片坏死灶 、细胞肿胀、有的出现囊腔,白质内神经纤维排列不规则。
图1 暴露的脊髓
图2 撞击器击打脊髓
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