货号: | MJ-1156 |
生长状态: | 良好 |
年限: | 永久 |
运输方式: | 常温/快递 |
器官来源: | 见名称 |
细胞形态: | 正常 |
免疫类型: | 文献 |
物种来源: | 人 |
相关疾病: | 咨询客服 |
组织来源: | Human |
品系: | ATCC |
细胞类型: | 说明书 |
数量: | 1X10^6 cells |
规格: | T25 |
问:我养的肿瘤细胞,传多少代以后不能用、需要重新复苏新的呢?我总觉得细胞形态不好,但长的还挺快!
答:初代培养的细胞在培养条件较好情况下,细胞增殖旺盛,并能维持二倍体核型,为保持二倍体细胞性质,细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。如不冻存,则需反复传代以维持细胞的适宜密度,以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10-50次左右,细胞增殖逐渐缓慢,以至完全停止。组织和细胞在培养中生命期如何,这要看细胞的种类、性状和原供体的年龄等情况。如人胚二倍体成纤维细胞培养,在不冻存和反复传代条件下,可传30-50代,人胚肺成纤维细胞可传50代±10代,人胚肾只有8-10代,人胚神经胶质细胞15-30代等。而肿瘤细胞系多由癌瘤建成,多呈类上皮型细胞,常能传几十代或百代以上,具有永生性及异体接种致瘤性等特点,但随着传代次数的增多,细胞增殖也会逐渐缓慢,形态亦会变化。另外,看看你的培养条件是否严格按照该肿瘤细胞的要求进行,条件变了细胞亦会适应新的环境而发生改变。可试试用质量好的进口血清培养,看细胞长的如何。
2、HepG3B细胞问题:
问:HepG3B细胞是一种什么细胞?与HepG2细胞有何区别?听说是本身就有乙肝病毒感染的,请问病毒的基因型和血清型是什么?能分泌表面抗原和e抗原吗?需要加G418吗?
答:HEP-3B human hepatocellular carcinoma established from the tumor tissue of an 8-year-old black boy in 1976;description: cells contain integrated hepatitis B virus genome;cells were described to produce a variety of proteins,e.g. alpha-fetoprotein, albumin,transferrin,alpha2-macroglobulin,alpha1-antitrypsin,haptoglobin and others;patented cell line;this cell line has been assigned by the ZKBS (German Central Commission for Biological Safety)to risk category 2 confirmed as human with IEF of AST, MDH,PEP B.
Viruses:ELISA:reverse transcriptase negative;PCR:EBV-,HCV-,HIV-,HTLV-I/II-.
HepG2普通的肝癌细胞,没有HBV整合。HEP-3B 培养不用加G418。
3、顺铂的保存问题:
问:从肿瘤医院买来的顺铂注射液,拿来的时候没有避光,大约有2小时,我想请教一下:不避光2小时对顺铂影响大吗?还可以用吗?还有,我应该怎么保存,4度避光保存,对吗?利用顺铂研究细胞凋亡,应该怎么配制溶液,配好可以维持多长时间不失效?
答:不避光2小时对顺铂影响不大,可放到4度避光保存。可以用生理盐水配制成10-40μg(具体视实验而定),可以放至少半年左右不失效。
4、HIT-T15细胞的培养问题:
问:请教HIT-T15细胞的培养方法,可以加入GETAMICINE等抗生素避免感染吗?请上传一些图片。在显微镜下会看到黑色的点,是不是被污染了呢?
答:在配制HIT-T15细胞培养基时,加入青霉素和链霉素两种抗生素就可以避免感染。显微镜下不应该看到黑点,典型的图片可以在ATCC的网上可以查看。
5、问:病毒的冻存和解冻的具体方法?
答:具体不知道,给一点资料希望对你有帮助吧!一些化学物质如甘油、蔗糖、谷氨酸钠等,能够减轻病毒在保存过程中其它理化因子对病毒的损伤,达到保持病毒的感染性、抗原性等生物活性:
(1)甘油——它是一种广泛使用的病毒保护剂,一般采用50%甘油盐水中,大多数细菌内杀灭但病毒却存活几十天、几个月、几年。
(2)二甲基亚砜——可以减少冷冻过程中微小冰晶的形成,因此对冻存的病毒有保护作用。
(3)病毒冻干保护剂——常用的有明胶、血清、胨、白蛋白、谷氨酸钠、葡萄糖、蔗糖等。它们对病毒的保护作用是多方面。如5-10%的糖类等低分子物质是通过使干燥样品的最终水分不致过低,防止蛋白质变性;而高分子物质则能促进病毒制品在冻干过程中的升华干燥,当冻干的病毒加水复原时,还能提高溶解性。
6、诱导培养基的问题:
问:最近养前脂肪细胞,需要诱导成脂肪细胞,关于诱导剂,有些问题想请教!
(1)诱导剂需要胰岛素和氢化可地松,去sigma的网站查了查,发现仅牛胰岛素就有6种,其中有两种写明用于细胞培养,应该用哪种药品?
(2)关于诱导剂胰岛素的配置说明中让用PH<2的冰醋酸配置,论坛中很多做过的朋友说用乙醇配置,是都可以么?会对后续实验有什么影响吗?
(3)诱导剂都是单独配置好浓储,保存在-20度里,用的时候现加到培养基中的吧(像单独加谷氨酰胺一样)?还是直接和培养基配置成诱导培养基,然后保存在4度里?
答:(1)I6634。(2)我们实验室用的是0.01M HCl配制的。(3)前者:个人认为每次用量比较少,没有必要配成储液,另外四度中诱导剂也比较容易被氧化(Mix)。
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