特异性强植物植物麦芽糖（maltose）ELISA试剂盒说明书

货号：	JEB-14434
样本：	血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织标本
标记物：	生物素（HRP)
应用：	仅用于科研
检测方法：	酶联免疫双抗夹心法
供应商：	南京金益柏生物科技有限公司
数量：	大量
规格：	48T/96T

一特异性强植物植物麦芽糖（maltose）ELISA试剂盒说明书是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
 
二ELISA试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

 

三试剂盒组成
1. 微孔板 (固相抗体)     96 well
2. 标记抗体 (30倍浓缩，HRP标记抗体)   0.4 ml
3. 标准品  0.5 ml × 2
4. EIA缓冲液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)  30 ml
5. 标记抗体稀释液 (1% BSA, 0.05% Tween-20 含有PBS)  12 ml
6. 显色液 (TMB底物液)   15 ml
7. 终止液 (1N硫酸)  12 ml
8. 洗涤缓冲浓缩液 (40倍浓缩，0.05% Tween-20的磷酸缓冲液) 50 ml
 
四ELISA操作中的洗涤
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相邻的孔，特别是每次洗板的前两遍，若高浓度的孔污染了低浓度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定会增高。 
b)特别注意：设计实验的时候要考虑实验孔的位置，保证甩掉洗液时，空白孔、低浓度孔或阴性对照组在上面或一侧或分开最好。同时注意甩掉洗液的动作翻转（从正上方旋转120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右摇摆、旋转来甩液体！甩出后以直线方式补2－3次甩出液体。 
c)用干净的滤纸，不要用卫生纸，因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底，导致洗板不干净，结果偏高或偏低，重复孔的数值也会相差很大。
d)每次拍板不要重复在一个地方拍，特别是洗去酶的步骤；拍板不宜过轻，否则拍不干净，拍板很用力不会对蛋白有什么影响。但注意不要太重，以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下，最后一次一定要扣干净。
e)不能减少洗液体积、洗板时间和次数。洗板时间太短，洗板效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。

五特异性强植物植物麦芽糖（maltose）ELISA试剂盒说明书检测程序
1.建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，第一孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔，最后，从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照，第八孔为零孔。
2.加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3.将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4.洗板：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5.每孔（除零孔）加第一抗体工作液50ul，置37℃ 60分钟。
6.洗板：操作同4。
7.每孔（除零孔）加酶标抗体工作液100ul（两滴），将反应板置37 oC 60分钟。
8.洗板：同前。
9.每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反应15分钟。
10.终止：每孔加入1滴终止液混匀。
11.测定：在450nm处测吸光值。 
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六特异性强植物植物麦芽糖（maltose）ELISA试剂盒说明书的应用
1.免疫酶染色各种细胞内成分的定位。
2.研究抗酶抗体的合成。
3.显现微量的免疫沉淀反应。
4.定量检测体液中抗原或抗体成分。
 
七操作过程中的提示
⑴ 严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30～60min。
⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
(3)封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致“花板”的出现。
(4)用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干：还要防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
(5)合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。
(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
(7)显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
(9)应保证C清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至最低限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。


八特异性强植物植物麦芽糖（maltose）ELISA试剂盒说明书样本处理
在收集标本前需有一个完整的计划，需要清楚要检测的成份是否足够稳定。ELISA检测提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。
 
九计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
 
十特异性强植物植物麦芽糖（maltose）ELISA试剂盒说明书常见问题 
Q正确的收集或保存是什么
A确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完全，充分混合并在一定的期限内使用。
Q如何正确的样本制备
A说明书中样本制备方法已经过性能测试验证，严格按照说明书推荐进行样本制备。确保使用正确的校正稀释液。
Q工作台温度不均衡怎么办
A避免在环境条件变化的位置孵育 96 孔板（如放置在通风处或窗台边）。
Q如何防止体系液体蒸发
A保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。使用同一种移液器吸取方式。
Q 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ？
A要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后：板条和板架都是可拆卸的，可以再用之，前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。
 
十一关于我们
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