提供商: | 西农生(北京)生物技术有限公司 |
服务名称: | 蛋白质组lable-free |
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一、样品处理
1、8个样品冻干,加入TFA水溶液从溶。
2、取8个C18脱盐柱分别加入100%乙jing离心。再加入TFA 离心。
3、8个C18脱盐柱分别加入从溶的样品,离心1min反复上样3次。
4、分别加入洗脱液离心1min,并收集离心后的洗脱液冻干。
5、将冻干后样品加入A液从溶后离心2min,取上清定量。
6、分别取相同的量进行质谱检测
二、肽图质谱检测
检测条件
液相:EASY-nLC1200
色谱条件:色谱柱:Dionex C18 PePMap300, 1.9um, 120Å; ID 150um, length 12cm。
流速:略
洗脱条件:
time | 0 | 8 | 24 | 60 | 79 | 80 85 86 90 |
%B | 5 | 5 | 13 | 28 | 40 | 95 95 6 6 |
质谱仪:QE
质谱条件:数据采集时间:78min, 喷雾电压 (spray voltage):2.0KV; 毛细管温度(caplillary temperature):320℃; 碰撞能量(normalized collision energy):27%, 采集质量范围:300-1400 Da。
CK_TIC
CK__BPC
单个样品重复3次
比较组间有统计意义的差异蛋白。