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多组学实验及数据分析系列研习会（第
蛋白质组学：蛋白表达与纯化实验技术
Western Blotting（免疫印迹）
通过海淀分局认证 
定量蛋白质组学iTRAQ
shotgun混合蛋白质鉴| 提供商： | 西农生（北京）生物技术有限公司 |
| 服务名称： | 蛋白质组lable-free |
声明：案例为本公司实际操作案例。为保护客户的权益与保密协议，在保证实验结果真实有效的前提下，我们对实验的数据进行了适当的变动处理，欢迎用户来我公司参观及考证结果真实性。请勿转载！责任自负！
一、样品处理
1、8个样品冻干，加入TFA水溶液从溶。
2、取8个C18脱盐柱分别加入100%乙jing离心。再加入TFA 离心。
3、8个C18脱盐柱分别加入从溶的样品，离心1min反复上样3次。
4、分别加入洗脱液离心1min，并收集离心后的洗脱液冻干。
5、将冻干后样品加入A液从溶后离心2min，取上清定量。
6、分别取相同的量进行质谱检测
二、肽图质谱检测
检测条件
液相：EASY-nLC1200
色谱条件：色谱柱：Dionex C18 PePMap300, 1.9um, 120Å; ID 150um, length 12cm。
流速：略
洗脱条件:
| time | 0 | 8 | 24 | 60 | 79 | 80 85 86 90 |
| %B | 5 | 5 | 13 | 28 | 40 | 95 95 6 6 |
质谱仪：QE
质谱条件：数据采集时间：78min, 喷雾电压 (spray voltage)：2.0KV; 毛细管温度（caplillary temperature）：320℃; 碰撞能量（normalized collision energy）：27%, 采集质量范围：300-1400 Da。
CK_TIC
CK__BPC
单个样品重复3次
比较组间有统计意义的差异蛋白。
